manual de procedimientos en el laboratorio de inmunohematologia

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGÍA



1. TOMA DE MUESTRA:

•La muestra de sangre la toman directamente de la bolsa satélite, según normativas del laboratorio en cuanto a criterio de aceptación de las muestras.

•Los tubos con muestras de donantes son centrifugadas 10 min. a 3000 rpm. En el caso de emplear suero en vez de plasma, este paso es muy importantepara evitar la presencia de residuos de fibrina que podrían interferir en el patrón de reacción.

•Los glóbulos rojos se utilizan para la prueba directa de tipificación ABO y Rh; el plasma y/o suero para prueba inversa y detección de anticuerpos.

•El plasma o el suero luego de separase del paquete globular, se conserva a una temperatura de 2º C a 8º C, durante un máximo de 48 hs. Cuando no seva a analizar inmediatamente se guarda a -20º C.

•Los estudios de discrepancias ABO, detección de antígeno D Debilitados, identificación de anticuerpos irregulares, prueba de antiglobulina directa poli y mono específica, estudio de Crioaglutininas, títulos de anticuerpos lgM e lgG, los realiza la Bioquímica Mónica Leri.

•Los sueros y/o plasmas una vez realizadas las pruebas, se guardan entubos vitis baby, en el freezer -20º C, donde conforman la seroteca.


2. RECOMENDACIONES GENERALES

Leer los instructivos de los reactivos. ¡Muy importante! Muchas veces las condiciones de una reacción varía con los distintos lotes o distintas procedencias del mismo (lgM de origen humano o suero lgM monoclonal)
Efectuar el control más completo posible cuando comience a utilizar unreactivo.
Emplear testigos en forma diaria, estos deben ser débiles a los fines de detectar cualquier variación en la prueba.
Calibrar las centrífugas. Evitar centrifugaciones excesivas o insuficientes. Las condiciones óptimas que se consiguieron en nuestra centrifuga, combinando revoluciones por minuto (rpm) versus tiempo, fueron:
Separación de suero: 3000 rpm 10 minuto
Lectura de aglutinaciones:1200 rpm 1 minuto
Lavados de G.R.: 2400 rpm 2 minutos
Al realizar una prueba de Coombs indirecta en tubo, tener especial cuidado en los 3 lavados de los GR sensibilizados. Se debe llenar los tubos de hemólisis con SF (dilución infinita), mezclar, centrifugar y descartar sobrenadante inmediatamente, sin dejar intervalos entre lavados.

Verificar que el material esté escrupulosamente limpio ysin ralladuras, que interfieran en la lectura.
Para detección de anticuerpos o pruebas de compatibilidad pretransfusional, utilizar suero fresco (menos de 24 hs a 4º C o conservado a -20º C). Este suero es rico en complemento.
Controlar el normal funcionamiento de heladeras y frezeer.


3-PREPARACIÓN DE SOLUCIONES, SUSPENCIONES CELULARES Y REACTIVOS UTILIZADOS EN INMUNOHEMATOLOGIA
3.1.PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
SOLUCIÓN FISIOLÓGICA (NaCl 0,9% v/v)
Es un reactivo crítico en inmunohematología. Se prepara por disolución de 9,0 g de NaCl en 1 litro de H20 destilada (desionizada, pasada por resina de intercambio aniónico y catiónico), debe ser recientemente preparada y no es necesario que sea estéril.
Se utiliza en general como medio para lavar y resuspender los hematíes.
ElpH bajo de la SF puede disminuir la sensibilidad de la prueba de Coombs, debe tener un pH entre 7-7.2.

SOLUCIONES DE BAJA FUERZA IÓNICA (LISS O SOSBI):
LISS: se pueden adquirir las soluciones comerciales en distintas presentaciones:
LISS2 diluyente
Se la utiliza para realizar suspensiones de eritrocitos, especialmente para trabajar con microplacas o con tarjetas en microcolumnasde Sefhadex.
LISS aditivo
Es utilizado para reducir el tiempo de incubación de la prueba de Coombs, se añade como un reactivo más.
LISS2 preservante
Se la utiliza para conservar suspensiones de eritrocitos (30 dias)

Estas soluciones de baja fuerza iónica, se pueden preparar según lo indican Low y Messeter: ("Antiglobulin test in low ionic strength salt solution for rapid...