manual de tinciones

Manual de tinciones para laboratorio de microbiología


Tipos de tinción
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).

Diferenciales. Se basan en elhecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo 6 que permite clasificar los microrganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estastinciones utilizan más de un colorante.

Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej.; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos. Pueden utilizarse uno o más colorantes.




















TINCIÓN SIMPLEFucsina básica


Consiste en colorear el frotis después de fijado, dejándolo actuar en el tiempo preciso, luego se lava con agua y se deja secar.

Co fucsina básica.
Procedimiento:
Se diluye 1/10 la solución de uso (fucsina fenicada de Ziehl) y se deja actuar 30 a 60 segundos.














Foto1
Coloración con Fucsina-básica visualización de la morfología de bacilosCon azul de metileno

Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe microrganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.
Procedimiento:
1. Extensión: poner una gota deagua en el portaobjetos y extender en ella la muestra (Escherichia y Bacillus) utilizando el asa de siembra.
2. Fijación: pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
3. Añadir Azul de metileno y esperar 2 minutos.
4. Lavar con agua
5. Secar.
6. Observar primero con el objetivo 40×; luego seañade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×. Tinción básica: se usa azul de metileno que si tiñe a las células.
















 Foto2
Alga, probablemente del género Nitzschia, conviviendo con las cianobacterias. Tinción con azul de metileno.



Método de Burri con Nigrosina
(Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no penetra en el interiorcelular.

Foto 4 Criptococcus neoformans. Tinción con tinta china
1. Proporciona una visión de la forma y el tamaño celulares al Colocar una gota de Nigrosina sobre uno de los extremos del portaobjetos.
2. Extender la muestra en la gota con el asa de siembra.
3. Realizar un frotis: con un segundo portaobjetos se extiende la muestra de modo que cubra toda la superficie del primero.
4.Secar al aire.
5. Observar (primero 40× y luego 100× con aceite de inmersión).

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Azul algodón lactofenol


Lactofenol al Azul Algodón: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos.

Solución de azul algodón
Sol. Saturada de azul algodón (azul anilina soluble).......10 ml
Glicerol..............10ml
Agua...................80 ml
Mezclar esta solución conlactofenol a partes iguales

el azul de lactofenol tiene tres funciones importantes a la hora de observar hongos del tipo mohos obtenidos por aislamiento o de medios inoculados, el fenol destruye la flora acompañante, el acido lactico conserva las estructuras fungicas al provocar un cambio de gradiente osmotico con relacion al interior del fungico generando una pelicula por asi llamarlo...