Manual de Virologia BUAP
Páginas: 70 (17405 palabras)
Publicado: 19 de mayo de 2014
BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LICENCIATURA: QUIMICO FARMACOBIÓLOGO
MANUAL DE LABORATORIO DE VIROLOGIA
AUTORES:
M. en C. JUAN CARLOS BENÍTEZ SERRANO.
M. en C. GLORIA LEÓN TELLO.
D. en C. ANA MARTA DE LOS ÁNGELES LOBO SÁNCHEZ.
M. en C. LAURA MARTÍNEZ PÉREZ.
M. en C. NIDIA GARY PAZOS SALAZAR.
M.S.P. CLAUDY LORENAVILLAGRÁN PADILLA.
2013
1
ÍNDICE
NÚMERO DE LA
TÍTULO DE LA PRÁCTICA
PÁGINA
PRÁCTICA
Práctica 1
Seminario: Pruebas de hemaglutinación (HA) e
4
inhibición de la hemglutinación (IHA).
Fundamentos y aplicaciones.
Práctica 2
Pruebas de hemaglutinación (HA) para el
9
diagnóstico preliminar del virus de la enfermedad
de Newcastle.
Práctica 3
Prueba deinhibición de la hemaglutinación (IHA)
12
para el diagnóstico definitivo del virus de la
enfermedad del Newcastle.
Práctica 4
Seminario: Modelos biológicos para el cultivo e
15
identificación de virus. Huevo fértil de pollo,
animales de laboratorio y cultivos celulares.
Práctica 5
Ensayos de las vías de inoculación en huevo fértil
21
de pollo.
Práctica 6
Replicación delvirus de la enfermedad de
25
Newcastle en huevo fértil de pollo.
Práctica 7
Titulación (DI50) del virus de la enfermedad de
28
Newcastle en huevo fértil de pollo.
Práctica 8
Preparación de un medio mínimo para el cultivo y
31
propagación de células.
Práctica 9
Taller demostrativo de proliferación de cultivos
35
celulares mediante subcultivo o pase 1:2.
Práctica10
Seminario: Pruebas para el diagnóstico clínico de
38
virus (ELISA, Inmunofluorescencia y Western
blot). Fundamentos, aplicaciones y limitaciones.
2
Práctica 11
Ensayos inmunoenzimáticos para el diagnóstico de
45
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)
antígeno de superficie del virus de la hepatitis B
(Ag HBs).
Práctica 12
Replicación de bacteriófagoslíticos en
50
Escherichia coli.
Práctica 13
Seminario de pruebas moleculares para el análisis.
54
PCR y sus variantes; retrotranscripción, múltiple,
anidada, tiempo real, RFLP, Souther blot,
Northern blot.
Práctica 14
Taller demostrativo para el diagnóstico molecular
60
de virus: PCR, electroforesis, restricción enzimática.
Bibliografía
72
3
BENEMÉRITA UNIVERSIDADAUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
Practica No. 1
Seminario: pruebas de hemaglutinación (HA) e inhibición de la
hemaglutinación (IHA) fundamentos y aplicaciones
Introducción
Desde el descubrimiento de los virus se estableció que, de acuerdo con sus propiedades
moleculares, estos agentes infecciososrequieren del empleo de sistemas biológicos para su
reproducción; esta condición hace particularmente difícil emplear sistemas adecuados tales como
los animales de laboratorio o cultivos celulares.
De esta manera se tuvieron que buscar
alternativas para el estudio de virus en el laboratorio que eliminasen la necesidad de emplear
células vivas.
Prueba de Hemaglutinación (HA)
Inicialmente, laHA se aplicó para el análisis del virus Influenza, sin embargo, se puede
aplicar para otros viriones que posean proteínas estructurales con capacidad hemaglutinante. El
nombre de hemaglutinación se debe al hallazgo de que los virus Influenza podían aglutinar
eritrocitos; posteriormente se determinó que el origen de esta propiedad se debía a la existencia
de una glicoproteína presente en laenvoltura viral a la cual se le denominó hemaglutinina. Esta
proteína actúa como el ligando viral que reconoce a su receptor en células blanco. En términos
generales, este receptor corresponde a moléculas de ácido siálico presentes sobre la superficie de
diversos tipos celulares, organizadas en diferentes enlaces químicos con otros carbohidratos.
La función de la hemaglutinina viral no es...
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LICENCIATURA: QUIMICO FARMACOBIÓLOGO
MANUAL DE LABORATORIO DE VIROLOGIA
AUTORES:
M. en C. JUAN CARLOS BENÍTEZ SERRANO.
M. en C. GLORIA LEÓN TELLO.
D. en C. ANA MARTA DE LOS ÁNGELES LOBO SÁNCHEZ.
M. en C. LAURA MARTÍNEZ PÉREZ.
M. en C. NIDIA GARY PAZOS SALAZAR.
M.S.P. CLAUDY LORENAVILLAGRÁN PADILLA.
2013
1
ÍNDICE
NÚMERO DE LA
TÍTULO DE LA PRÁCTICA
PÁGINA
PRÁCTICA
Práctica 1
Seminario: Pruebas de hemaglutinación (HA) e
4
inhibición de la hemglutinación (IHA).
Fundamentos y aplicaciones.
Práctica 2
Pruebas de hemaglutinación (HA) para el
9
diagnóstico preliminar del virus de la enfermedad
de Newcastle.
Práctica 3
Prueba deinhibición de la hemaglutinación (IHA)
12
para el diagnóstico definitivo del virus de la
enfermedad del Newcastle.
Práctica 4
Seminario: Modelos biológicos para el cultivo e
15
identificación de virus. Huevo fértil de pollo,
animales de laboratorio y cultivos celulares.
Práctica 5
Ensayos de las vías de inoculación en huevo fértil
21
de pollo.
Práctica 6
Replicación delvirus de la enfermedad de
25
Newcastle en huevo fértil de pollo.
Práctica 7
Titulación (DI50) del virus de la enfermedad de
28
Newcastle en huevo fértil de pollo.
Práctica 8
Preparación de un medio mínimo para el cultivo y
31
propagación de células.
Práctica 9
Taller demostrativo de proliferación de cultivos
35
celulares mediante subcultivo o pase 1:2.
Práctica10
Seminario: Pruebas para el diagnóstico clínico de
38
virus (ELISA, Inmunofluorescencia y Western
blot). Fundamentos, aplicaciones y limitaciones.
2
Práctica 11
Ensayos inmunoenzimáticos para el diagnóstico de
45
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)
antígeno de superficie del virus de la hepatitis B
(Ag HBs).
Práctica 12
Replicación de bacteriófagoslíticos en
50
Escherichia coli.
Práctica 13
Seminario de pruebas moleculares para el análisis.
54
PCR y sus variantes; retrotranscripción, múltiple,
anidada, tiempo real, RFLP, Souther blot,
Northern blot.
Práctica 14
Taller demostrativo para el diagnóstico molecular
60
de virus: PCR, electroforesis, restricción enzimática.
Bibliografía
72
3
BENEMÉRITA UNIVERSIDADAUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
Practica No. 1
Seminario: pruebas de hemaglutinación (HA) e inhibición de la
hemaglutinación (IHA) fundamentos y aplicaciones
Introducción
Desde el descubrimiento de los virus se estableció que, de acuerdo con sus propiedades
moleculares, estos agentes infecciososrequieren del empleo de sistemas biológicos para su
reproducción; esta condición hace particularmente difícil emplear sistemas adecuados tales como
los animales de laboratorio o cultivos celulares.
De esta manera se tuvieron que buscar
alternativas para el estudio de virus en el laboratorio que eliminasen la necesidad de emplear
células vivas.
Prueba de Hemaglutinación (HA)
Inicialmente, laHA se aplicó para el análisis del virus Influenza, sin embargo, se puede
aplicar para otros viriones que posean proteínas estructurales con capacidad hemaglutinante. El
nombre de hemaglutinación se debe al hallazgo de que los virus Influenza podían aglutinar
eritrocitos; posteriormente se determinó que el origen de esta propiedad se debía a la existencia
de una glicoproteína presente en laenvoltura viral a la cual se le denominó hemaglutinina. Esta
proteína actúa como el ligando viral que reconoce a su receptor en células blanco. En términos
generales, este receptor corresponde a moléculas de ácido siálico presentes sobre la superficie de
diversos tipos celulares, organizadas en diferentes enlaces químicos con otros carbohidratos.
La función de la hemaglutinina viral no es...
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