Manual listeria

Manual de Procedimientos

Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes

2008

AUTORES
Raquel Callejo Mónica Prieto Claudia Martínez Lorena Aguerre Florencia Rocca Gisela Martínez

Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” Centro Regional de Referencia del WHOGlobal Salm Surv para América del Sur

Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes

CONTENIDO DEL MANUAL
• SECCIÓN

I:

INTRODUCCIÓN INVESTIGACIÓN DE Listeria monocytogenes EN MUESTRAS CLÍNICAS IDENTIFICACIÓN DE Listeria monocytogenes IDENTIFICACIÓN DE SEROTIPOS DE Listeria monocytogenes POR PCR

• SECCIÓN

II:

• SECCIÓN

III:

• SECCIÓN

IV:

•SECCIÓN

V:

SEROTIPIFICACIÓN DE Listeria monocytogenes CON ANTISUEROS

• SECCIÓN

VI:

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria

SECCIÓN I 1. INTRODUCCIÓN El género Listeria está compuesto por bacterias gram positivas con bajo contenido G+C, estrechamente relacionado con los géneros Bacillus, Clostridium, Enterococcus,Streptococcus y Staphylococcus. Son bacilos aerobios o anaerobios facultativos, no esporulados, no capsulados, catalasa positiva, móviles entre 10 y 25ºC (Collins et al., 1991). Listeria ha sido aislada de diferentes sitios ambientales, como; suelo, agua, efluentes, de una gran variedad de alimentos y de heces humanas y animales. El habitat natural de estos microorganismos es probablemente lamateria orgánica vegetal en descomposición y los rumiantes domésticos contribuyen al mantenimientos de Listeria spp. en el ambiente rural a través de un ciclo continuo de enriquecimiento oral-fecal (Fenlon, 1999). La amplia distribución de L. monocytogenes se debe a la capacidad de sobrevivir durante períodos de tiempo prolongados en diferentes medios. El género Listeria comprende seis especies: L.monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L. innocua, L. welshimeri y L. grayi. Las dos especies potencialmente patógenas son L. monocytogenes y L. ivanovii. L. monocytogenes no fue considerado un patógeno animal hasta fines de la década del 70. A principios de los años 80 emerge como uno de los patógenos humanos de origen alimentario más importante. A partir de ese momento, la literatura sobreListeria comenzó a incrementarse y a partir de 1983 una serie de brotes epidémicos humanos en Norteamérica y Europa establecieron claramente a la listeriosis como una grave infección alimentaria (Bille, 1990). Los alimentos más frecuentemente asociados con brotes y con alto nivel de riesgo son quesos y productos lácteos, patés y salchichas, pescados ahumados, ensaladas y en general productosindustrializados, refrigerados, listos para el consumo, sin requerimientos de cocción o calentamiento previo (Farber and Peterkin, 1991). Los alimentos se pueden contaminar en cualquier eslabón de la cadena productiva, así como también en el almacenamiento en frío. En la actualidad, se estima que L. monocytogenes es la principal causa de muerte originada por bacterias de origen alimentario en USA,aproximadamente se registran 2500 casos de listeriosis humana por año, incluyendo 500 muertes (Mead et al., 2006). En rumiantes, la infección por Listeria es transmitida por consumo de silaje en mal estado, en el cual la bacteria se multiplica rápidamente, dando lugar a brotes en ganado (Fenlon, 1999). El genoma de L. monocytogenes fue secuenciado recientemente y posee un cromosoma circular de 2.944.528pb con un promedio de G+C de 39%. Se han identificado 2853 genes, sin embargo al 35.3% no se les conoce función. En el caso de L. innocua posee un único cromosoma circular de 3.011.209 pb con un contenido promedio de G+C del 37%. Dentro del género Listeria, estas dos especies presentan alto grado de homología en la secuencia del 16S rRNA, siendo las de mayor cercanía taxonómica (Von Both et al.,...