Manual Microbiológico de Pruebas bioquímicas

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MAZATLÁN
INGENIERÍA BIOQUÍMICA VI

MATERIA:
MICROBIOLOGÍA
M.C SANCHEZ HUMARÁN IRMA LORENA

MANUAL DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS
EQUIPO 2:
CANIZALES SILVA NUVIA JASSETH
FLORES RUIZ MARGARITA
MORENO DERAS JESSICA
PINEDA ESCOBAR YUKARI YASMIN
VIERA RAMOS RAMON
ZARATE CRESPO ANAYANSY SARAHY


AGAR KLIGLER
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologíade alimentos para la diferenciación de entero bacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario parala producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y  producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio delindicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Ingredientes
Fórmula (en gramos por litro)
Peptona de carne
13.0
Cloruro de sodio
5.0
Lactosa
10.0
Tripteina
10.0
Glucosa
1.0
Citrato de hierro y amonio0.5
Tiosulfato de sodio
0.3
Rojo de fenol
0.025
Agar
15.0
Instrucciones
Suspender 54.8 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Modo de siembra
A partir de un cultivopuro del microorganismo en estudio, sembrar el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo)
Solamente fermenta la glucosa
Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo)
Fermenta glucosa y lactosa
Pico alcalino/fondo alcalino (picorojo/fondo rojo)
No fermentador de azúcares
Presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo
Productor de gas
Ennegrecimiento del medio
Productor de ácido sulfhídrico



CITRATO DE SIMMONS
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuesto amoniacales como única fuente de nitrógeno. El medio contiene citrato sódico, fosfatode amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornará azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradación del fosfato amónico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente decarbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato comoúnica fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a...