manual shigella

Ministerio de Salud y Ambiente
Secretaría de Políticas, Regulación y Relaciones Sanitarias

Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud
“Dr. Carlos G. Malbran”

Manual de Procedimientos

Diagnóstico, aislamiento y
caracterización de
Shigella spp.

SERVICIO ENTEROBACTERIAS
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍA
Buenos Aires – Argentina
2005

INDICE
CAPÍTULO I-INTRODUCCIÓN

3

CAPÍTULO II- AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE SHIGELLA spp.

5

1.-ESPECÍMENES

5

2.-PROCESAMIENTO

5

2.1.-AISLAMIENTO

5

2.2.-IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE SHIGELLA spp.

7

Pruebas Bioquímicas Diferenciales

9

Agar Hierro Tres Azúcares y Agar Kligler

10

Agar Lisina Hierro

13

Prueba del Indol

14

Prueba de la Beta Galactosidasa

16Test de Utilización de Azúcares

18

Test de Decarboxilasa-Dehidrolasa

20

Prueba del Acetato

22

Prueba del Mucato

23

Citrato de Christensen

24

2.3.-SEROTIPIFICACIÓN DE SHIGELLA spp.
Flujograma para Serotipificación de Shigella spp.

25
28

CAPÍTULO III- IDENTIFICACIÓN DE SHIGELLA spp. Y DETECCIÓN DE
FACTORES DE VIRULENCIA POR REACCIÓN DE LA POLIMERASA ENCADENA (PCR)

30

1.- INTRODUCCIÓN

30

2.- PROCEDIMIENTO GENERAL

34

3.- PROTOCOLOS ESPECÍFICOS PARA SHIGELLA spp.

37

3.1.- PCR para Identificación de Shigella spp.

37

3.2.- PCR para Identificación de S. sonnei y S. flexneri

38

3.3.- PCR para Detección de factores de Virulencia de Shigella spp.

40

CAPÍTULO IV-MEDIOS DE CULTIVO Y PRUEBAS BIOQUÍMICAS

44

AgarMcConkey

44

Agar EMB

44

Agar SS

45

Agar XLD

46

Agar Hektoen

47

PLANILLAS DE RESULTADOS

48

2

CAPÍTULO I - INTRODUCCIÓN
Las bacterias del género Shigella, de la familia Enterobacteriaceae, son bastones Gram
negativos, de 0.3 a 1 µm de diámetro y de 1 a 6 µm de longitud, que pueden estar solos,
en cadenas o de a pares. Son no móviles, no esporulados,anaerobios facultativos, oxidasa
negativo, fermentan la glucosa y otros azúcares sin producción de gas, Voges-Proskauer
negativo y rojo de metilo positivo. No utilizan citrato de Simmons, no producen SH2 y
son lisina descarboxilasa, arginina dehidrolasa y ureasa negativos (Tabla 1). La
temperatura de crecimiento óptima es 37º C.
El género está formado por Shigella dysenteriae (serogrupo A); Shigellaflexneri
(serogrupo B); Shigella boydii (serogrupo C); Shigella sonnei (serogrupo D).
La shigellosis, infección causada por Shigella spp., está distribuida en todo el mundo,
pero es endémica en países tropicales y de clima templado con mayor incidencia en
verano. Es causa de infección intestinal aguda en niños pequeños. Las 2/3 partes de los
casos y la mayoría de las defunciones ocurren enniños de 6 meses a 10 años.
Representan también un riesgo para viajeros que se trasladan hacia áreas endémicas y son
frecuentes los brotes en condiciones de hacinamiento y falta de saneamiento como
cárceles, hospitales psiquiátricos, geriátricos, campamentos y a bordo de embarcaciones.
Shigella tiene como únicos huéspedes al ser humano y a los primates. La enfermedad se
transmite de persona apersona por la vía fecal-oral, por alimentos contaminados donde el
vector de transmisión son las moscas, o por el uso de aguas contaminadas para la
preparación de los mismos.
La bacteria es altamente infecciosa por la ruta oral, la ingestión de tan sólo 10 a 100
organismos produce infección en voluntarios. La gravedad y la letalidad de la infección
dependen de la edad de la persona, del estadonutricional, de la magnitud de la dosis
infectante y del serotipo del microorganismo.
Shigella dysenteriae produce la forma más severa de la enfermedad, con una tasa de
letalidad del 20%. En cambio las infecciones por otras especies de Shigella se autolimitan
y rara vez son fatales, excepto en huéspedes inmunocomprometidos, ancianos y niños
pequeños. Shigella flexneri también puede...