Manual

PRÁCTICA No.1

“MÉTODOS DE OBTENCIÓN DE MICROORGANISMOS INACTIVADOS Y ATENUADOS”

1. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos pueden ser de tipo infeccioso o no. Sin embargo, en la elaboración de vacunas a base de virus o bacterias se busca que éstas tengan un doble efecto: eliminar el potencial de causar enfermedad por parte del microorganismo y que sean capaces de sobrevivir en el huéspedpara iniciar una respuesta inmune protectora. Si bien la diferencia entre microorganismos vivos y “muertos” es solo de carácter bioquímico, ejerce una profunda influencia en la eficacia de las vacunas. Cuando se elaboran vacunas vivas, los microorganismos empleados se someten a un proceso de disminución de la virulencia, hasta el punto en que, si bien están vivos, no son capaces de causarinfección. Este proceso se conoce como atenuación (2). Existen diferentes métodos de atenuación, los cuales implican la adaptación de los microorganismos a condiciones insólitas, de manera que pierdan su capacidad de adaptación al huésped original. Inicialmente, la atenuación se logro de manera empírica ante la modificación de las condiciones de crecimiento de los microorganismos (3). El primer ejemplo deello es cuando Pasteur logró la producción de formas vivas no virulentas del bacilo del cólera aviar y del carbunco, ésta última al cultivarla en agar con suero al 50% en una atmósfera rica en CO2, de forma que perdió su capacidad para formar cápsula. Otro ejemplo es el de una cepa virulenta de Mycobacterium tuberculosis que resultó atenuada por casualidad en 1908 cuando Calmette y Guérin, en elInstituto Pasteur agregaron bilis al medio de cultivo. Al cabo de trece años bajo estas condiciones, la cepa resulto atenuada y fue utilizada con éxito para vacunar a los niños con tuberculosis (1). Por el contrario, los métodos para elaborar vacunas hechas a base de microorganismos muertos o inactivados, recurren, por ejemplo, al calentamiento o a la acción de sustancias químicas. Sin embargo, enambos casos se busca que se produzcan pocos cambios en los antígenos que estimulan la inmunidad protectora. Actualmente se recurre al uso de vacunas a base de microorganismos atenuados como es el caso de la vacuna TY21a hecha a base de Salmonella entérica serovar Typhi (2) o la realizada a base de Vibrio cholera, entre algunas.

En esta practica se espera realizar la inactivación y atenuaciónde microorganismos y adquirir las habilidades y conocimientos que servirán como base para la inactivación de otros utilizados en procedimientos posteriores.

2. OBJETIVO (S) en esta practica vamos adquirir el conocimiento y las bases para relizar la atenuación y activación de microrganismos
3. MATERIAL

* SOLUCIONES Y REACTIVOS
Sol. Salina fisiológica*, sol. Salina fisiológicaformalinizada al 0.3%*, formaldehido, agar y caldo soya tripticasa.

* CEPAS
Cepa de Salmonella *

* EQUIPO
Incubadora, vortex, centrífuga, campana de flujo, termobaño

* MATERIAL
Tubos de ensaye con rosca de 20 ml estériles*, asa bacteriológica, cajas Petri, matraz Erlenmeyer de 100 ml, pipetas Pasteur estériles*, pipetas de 5 ml estériles*, mechero Bunsen, papel aluminio*Material preparado por el alumno con anticipación, junto con nueve placas o tubos con medio líquido.

4. PROCEDIMIENTO

1. Trabajar en condiciones de esterilidad.
2. Inocular 9 tubos estériles con 15 ml de caldo nutritivo de la cepa Salmonella e incubar a 37ºC por 18 a 24 hrs *.
3. Numerar los tubos y realizar los siguientes tratamientos.
4. Cosechar con asabacteriológica el crecimiento bacteriano de los tubos 1, 2 y 3 en tubos limpios y estériles con 5 ml de solución salina fisiológica. Agitar vigorosamente hasta obtener una suspensión homogénea.
5. Colocar los tubos 1 y 2 en termo baño a ebullición durante 60 minutos.
6. Centrifugar los tubos 1, 2 y 3 a 3000 rpm durante 20 min.
7. Desechar el sobrenadante y resuspender el sedimento...