Manual

Facultad de Química
Departamento de Bioquímica

Material de apoyo para los estudiantes del curso
Bioquímica experimental (0141)

Elaborado por: Dra. Sobeida Sánchez Nieto

Editora: Dra. Nahieli Greaves Fernández
Semestre 2013-1

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INTRODUCCIÓN
El material que aquí se presenta está dirigido a los estudiantes de licenciatura, en especial
aquellos que buscan introducirse en labioquímica y como material de apoyo para los
estudiantes del curso Bioquímica experimental (0141) de la Facultad de Química.
Se presenta de manera sencilla y resumida las técnicas de mayor uso en la bioquímica y la
biología molecular. Comenzando con las partes del método científico y como realizar un
reporte, tarea que aunque los alumnos han ido llevando a lo largo de sus cursos en la
Facultad deQuímica, es distinta, en el curso de la Bioquímica experimental se les introduce
al manejo y presentación de la información que obtendrán de un experimento de manera
similar a como se hace en los artículos científicos.
Después se avanza sobre los conocimientos básicos de bioquímica, como por ejemplo la
introducción en el uso de la espectroscopía y la curva patrón para determinar biomoléculas.Se presenta una guía para realizar la purificación mediante el seguimiento secuencial de
varios pasos de purificación como la precipitación por salado, desalado, cromatografía de
intercambio iónico y de afinidad. Para reconocer si el proceso de purificación fue óptimo se
les introduce sobre los conceptos de pureza y rendimiento, los cuáles son el resultado del
monitoreo del proceso depurificación el cual proviene de la determinación de proteínas, el
corrimiento electroforético de las diferentes fracciones de la purificación y la medición de la
actividad enzimática de estás fracciones. Adicionalmente, los alumnos contaran con la
información mínima necesaria para determinar los parámetros cinéticos de una enzima y la
influencia de los inhibidores. Es pues, que en está primera partese presentan los conceptos
sobre la estructura, propiedades y función de las proteínas.

El contenido en la segunda parte es igualmente rico, se presenta la estructura, propiedades y
función de los ácidos nucleicos. Existe abundante información respecto a la secuenciación de
genomas y las posibilidades de obtener proteínas recombinantes u organismo genéticamente
modificados. Es por ello quelos alumnos recibirán de manera concisa los fundamentos de
las técnicas más utilizadas en biología molecular. En está sección se les presentan dos
formas distintas de transferencia horizontal: la conjugación y la transformación. Se describen

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las técnicas de monitoreo fenotípico (resistencia a antibióticos, producción de proteína
recombinante), genotipo (obtención del plásmido yrestricción).

Por último, encontraran que la expresión genética se modifica por varias circunstancias, en
particular se revisa el caso del operón lac.

Si bien existen numerosos y excelentes libros en los que los estudiantes pueden encontrar
está información, la mayor parte de los libros están escritos para especialistas en el campo,
en este escrito se presentan aquellos aspectos que llevaran alestudiante a comprender
como en la práctica se realiza la purificación de proteínas o bien la introducción de un
transgen a un organismo como E. coli.

Sobeida Sánchez Nieto

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CONTENIDO
Sección
I

Nombre
Introducción al laboratorio de Bioquímica
Parte I: Reporte científico
Parte II: Revisión de métodos espectroscópicos y elaboración de curva
estándar de proteínas

IIEstructura y propiedades de proteínas: Purificación de la enzima lactato
deshidrogenasa de músculo esquelético de pollo
Parte I. Extracción y precipitación por salado.
Parte II. Purificación por cromatografía de intercambio iónico y de
afinidad
Parte III. Monitoreo del proceso de purificación. A. Determinación de
concentración de proteínas.
Monitoreo del proceso de purificación. B. Separación...