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Marco teórico
Espectrofotometría
Aparato de alta precisión que se usa en colorimetría para analizar la composición espectral de una muestra de luz (reflejada o incidente).

La espectrofotometría es un método de análisis que hace uso entre la materia y la energía radiante la cual se refiere a como las ondas electromagnéticas se propagan y transportan sin interferencia de materia. La absorbanciaes una medida cuantitativa útil y está relacionada con la concentración a través de la ley de Beer-Lambert, la cual establece lo siguiente:
A = εCl

Donde A es la absorbancia de la muestra a una longitud de onda dada, ε es el coeficiente de extinción del compuesto a esa longitud de onda y sus unidades son (M∙cm)-1, c es la concentración molar de la especie que absorbe, y les la longitud de paso de la celda que contiene la solución donde se realiza la medición y está dada en cm. Así, si el coeficiente de extinción es conocido, la absorbancia de la solución puede ser usada para calcular la concentración de la especie en solución (asumiendo que la única especie que absorbe es el compuesto de interés).
La explicación anterior de por qué medimos la absorbancia noexplica lo que significa la absorbancia en sí.

Los espectrofotómetros tienen entonces la habilidad de medir absorbancia a valores específicos de longitud de onda. El método usado más comúnmente involucra un monocromador que permite descomponer la luz incidente en sus componentes con diferentes longitudes de onda y de esta forma escoger una longitud de onda a la cual una muestra dada absorbe con mayorintensidad. La habilidad para medir la absorbancia a diferentes longitudes de onda es muy útil porque el coeficiente de extinción varía al variar la longitud de onda. Además, el espectro de absorbancia puede variar dependiendo de la composición química del compuesto y el ambiente (solvente) alrededor de este.



LEY DE BOURGUER-LAMBERT- BEER
Bourguer, Lambert y Beer, a través de sus observacionesestablecieron relaciones de la variación de la intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor de ella o con la concentración de la sustancia, para materiales translúcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer o ley general de la espectrofotometría que permite hallar la concentración de una especie química a partir de la medida de la intensidad de luzabsorbida por la muestra.
Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendo luz monocromática, como:
It / I0 = 10 - bc
 Donde It es la intensidad de luz transmitida por la muestra, I0 la intensidad de luz que incide sobre la muestra y que proviene de la fuente, el coeficiente de absortividad molar en unidades de M-1cm-1,, b es la longitud de la trayectoriadel haz de luz a través de la muestra o el espesor de la celda en centímetros o lo que se conoce como paso óptico.
La relación It / I0 se conoce como transmitancia, T, y es la medida primaria que se realiza en los instrumentos para medir la absorción de luz por parte de una muestra. Si la relación se expresa en forma porcentual, entonces se llama porcentaje de transmitancia:
% T = 100.It / I0
Laluz absorbida sería I0 - It es decir la diferencia entre la intensidad de la luz incidente y la intensidad transmitida después de pasar a través de la muestra. A veces se expresa en forma porcentual en función de la transmitancia medida como:
Porcentaje de absorción = (T blanco – T muestra.) x 100 o absorbancia.
Cuando se toma el logaritmo decimal negativo de la relación It / I0, entonces:
-log It /I0 = - log T o igual que log I0 /It == logI0 - logIt
Relación que representa la cantidad de luz absorbida por la muestra.
La relación -log It / I0 = - log T recibe el nombre de Absorbancia y se designa por A.
La ley de Bourguer-Lambert-Beer se puede entonces escribir de las siguientes formas:
It / I0 = 10 - bc  , - log T =  b C , -log T = A =  b C
Siendo C la concentración del soluto en...