Marina

INTRODUCCION
La técnica ELISA (ensayos de inmunoabsorbencia ligada a enzimas) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa oindirectamente producen una reacción marcada enzimáticamente cuyo producto, puede ser medido espectrofotométricamente. La cantidad de antígeno se determina comparando la curva estándar generada con cantidadesconocidas del antígeno. Ventajas: versátil, robusto, simple en su realización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fasesólida, de una separación fácil entre la fracciónretenida y la fracción libre, es fácil de adaptar a analizadores automáticos. Este se caracteriza por ser un método cuantitativamente exacto por la medición de la velocidad de la reacción y la duración dela reacción en un instante fijo único Desventajas: para adaptarlo a analizadores automáticos se necesitan de reactivos muy purificas, lo que aumenta el costo de las pruebas.
OBJETIVO
Conocer losprincipios en los que se basa la prueba de ELISA.
Conocer la importancia de este tipo de prueba y su aplicación en el ámbito de la medicina.
MATERIALES
Algodón
alcohol
Vacutainer completoPosillosAgua destilada
EQUIPOS
Centrifuga
MicropipetasIncubadora
REACTIVOS
Simple dilución
Buffer
Conjugado
Cromógeno A y B
Solución estopín
PROCEDIMIENTO
PRUEBA CROMATOGRAFICA
Sacar sangre tubo alvacío.

Centrifugar

Poner una gota o 50ul de suero en el caset.

Luego agregar una gota de sample de dilución.

Esperar 15 minutos
Resultado: negativo

PRUEBA DE ELIZA
Hacer la dilución1/20.

Rotular los pocillos como Mx y el otro blanco.

Poner 50ul de muestra para el primer pocillo.

Poner 50ul de conjugado para los dos pocillos y cubrir con papel parafil.

Incubar a 37°Cpor 10 minutos.

Lavar 5 veces con la dilución 1/20.

Luego agregar cromógeno A y B a los dos pasillos

Luego llevar a incubar en cámara oculta a 37°C por 1 hora.
Añadir 50ul de solución...