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“AÑO DE LA INTEGRACIÓN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD”
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA





FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
INFORME DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N °: 03

TEMA : EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO: CALCULO DEL KM
CURSO : BIOQUÍMICA.
NOMBRE : ANCAJIMA TIMANÁ FRANCISCO FERMÍN.
CICLO: IV.
DOCENTE : Blgo. HENRY ROBLES CUEVA.
FECHA : 2 DE OCTUBRE, 2012.

PIURA-PERÚ


I. INTRODUCCIÓN
La función fundamental de las enzimas es aumentar la velocidad de las reacciones químicas que ocurren en los seres vivos. El comportamiento de esa velocidad y su modificación debido a la presencia de diferentes agentes físicos físicos o químicos constituye el objeto deestudio de la cinética enzimática1.
La cantidad de enzima se indica habitualmente en unidad de actividad enzimática (U). Se define la unidad de actividad enzimática como la actividad de enzima que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto (µmol/min), bajo condiciones óptimas de temperatura y pH. Normalmente, las unidades de actividad que contiene una solución se suele expresaren función de la misma, en U/mL de solución o referida a la cantidad de proteína presente en la solución, expresada en U/mg de proteína. En este último caso, la actividad enzimática se denomina actividad específica2.
El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los inhibidores. Uno de losprincipales estudios que se realizan en una enzima es medir el efecto en la velocidad de la reacción cuando se modifican las concentraciones del sustrato y se mantienen constantes la concentración de enzima, el pH, la fuerza iónica del medio, la temperatura, entre otros3. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bienmidiendo la aparición de los productos o la desaparición de los reactivos4.
En las reacciones no catalizadas por enzimas la formación de producto depende linealmente de la concentración de sustrato añadido. Mientras que en las reacciones catalizadas por enzimas, generalmente se obtiene una dependencia hiperbólica de la velocidad respecto a la concentración de sustrato, distinguiéndose 3 partesdistintas en la curva. En la primera parte, a bajas concentraciones de sustrato, de tal manera que si se duplica la concentración de sustrato, se duplica la velocidad (reacción de primer orden). La segunda parte de la curva, a concentraciones intermedias de sustrato, la velocidad se incrementa menos que en la primera parte con el incremento de la concentración, iniciando alrededor de la ½ de la Vmax .La última parte de la curva, a altas concentraciones de sustrato, la velocidad es independiente de la concentración de sustrato (reacción de orden cero), así la velocidad alcanzada es cercana a la máxima5.El objetivo de la presente práctica tiene como objetivo estudiar la influencia de la concentración del sustrato sobre la velocidad de una reacción enzimática, para lo cual se utilizará la enzimaglucosa oxidasa

II. MATERIAL Y MÉTODOS
Se colocaron cuatro tubos de ensayo, en una gradilla los cuales fueron rotulados con un número (tubo 1, tubo 2, tubo 3, tubo 4) y se adicionó con una pipeta 1mL de reactivo de trabajo(RT), una solución previamente preparada que contiene 4-aminofenazona, glucosa oxidasa, peroxidasa, agua destilada; en cada uno de los tubos de ensayo.
Luego se agregó conla ayuda de una micropipeta: 10µl de glucosa al tubo 1, 20 µl de glucosa al tubo 2, 30 µl de glucosa al tubo 3 y por último 40 µl de glucosa al tubo 4; se mezclaron respectivamente y se incubarón a una temperatura de 370Cpor un tiempo de 10 minutos.
Transcurrido el tiempo predeterminado; se inició el blanqueado del espectrofotómetro colocando un tubo de ensayo adicionándole agua destilada y lo...