MASTITIS BOVINA CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE LA TOXINA A

INSTITUTO TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE MONTERREY
MASTITIS BOVINA
CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE LA TOXINA A

Ariel Orlando Sotelo Gallegos




Staphylococcus aureus es uno de los microorganismos causantes de la mastitis bovina gracias al gen de la toxina A que este produce, la mastitis bovina genera granes perdidas monetarias en el sector lechero, por lo cual encontrar una solución esindiscutiblemente necesario. Utilizando vectores de expresión y clonación se propuso insertar este gen reprimido, en plantas para generar una vacuna mediante la ingesta de alimento. Palabras clave: Staphylococcus aureus, vector plásmido,electroforesis, PCR, Digestión enzimática
Índice
INTRODUCCION……………………………………………………………………………..2
Mastitis bovina………………………………………………………………………………...2
Staphylococcus aureus………………………………………………………………………3
Vectores de Clonación y Expresión……………………………………………………......4
Reacción en Cadena de la Polimerasa…………………………………………………….6
Electroforesis………………………………………………………………………………….7METODOLOGIA……………………………………………………………………………...8
Equipo………………………………………………………………………………………….8
Materiales……………………………………………………………………………………..8
Reactivos generales………………………………………………………………………….9
Miniprep………………………………………………………………………………………..9
Gel de agarosa y Electroforesis……………………………………………………………..9
Obtención y transformación de células competentes……………………………………10
Digestión Enzimática…………………………………………………………………..……10
Reacción en cadena de la Polimerasa…………………………………………………….10
MaterialBiológico…………………………………………………………………………….10
Purificación de Ampicilina……………………………………………………………………11
Preparación de Caldos……………………………………………………………………….11
Transformación de células competentes CaCl2 y choque térmico……………………...11
Extracción Plasmidica (Miniprep)…………………………………………………………...12
Cuantificación…………………………………………………………………………………13
Digestión enzimática…………………………………………………………………………13
Gel deagarosa………………………………………………………………………………..13
Electroforesis………………………………………………………………………………….14
Reacción en Cadena de la Polimerasa…………………………………………………….15

RESULTADOS……………………………………………………………………………….16
DISCUSIÓN…………………………………………………………………………………..18
CONCLUCION……………………………………………………………………………….21
EXPECTATIVAS……………………………………………………………………………. 21
BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………………….. 22
INTRODUCCION
Mastitis bovina
La mastitis bovina esuna enfermedad infecto-contagiosa de la glándula mamaria, en la cual la inflamación se produce como respuesta a la invasión, a través del canal del pezón, de diferentes tipos de bacterias, micoplasmas, hongos, levaduras y hasta algunos virus. Sin embargo, las bacterias de los géneros Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium y algunos gérmenes Gram negativas, son responsables de más del 90 %de los casos clínicos y subclínicos. La enfermedad puede cursar como subclínica o como clínica, con alteraciones macroscópicas de la leche y síntomas palpables de la ubre y, a veces, de tipo sistémico en todo el animal. Clásicamente se la ha definido como una “enfermedad polifactorial”, porque el riesgo de infección depende de la habilidad de la vaca para rechazarla, del tipo, número ypatogenicidad de las bacterias presentes en un rodeo y, fundamentalmente, de las condiciones de medio ambiente, del manejo en general y del manejo del ordeño en particular que se estén desarrollando en un establecimiento (Corbelini, sf)
Las bacterias que pueden producir mastitis sobreviven en diferentes nichos ecológicos, difiriendo por lo tanto en su mecanismo de trasmisión e infección y en la facilidadcon la cual pueden ser controladas. Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae están fundamentalmente asociados a ubres infectadas, lesiones de los pezones y colonización del canal del pezón, trasmitiéndose de vaca a vaca y de cuarto a cuarto al momento del ordeño o poco después. Estas infecciones se controlan bien por la...