Materiales y Metodos transformacion bacteriana

Materiales y Métodos:
La primera parte del experimento consistía en transformar la bacteria competente Escherichia coli con unplásmido. La transformación bacteriana es un proceso por el que las células abre microporos y permite la entrada de ADN independiente delcromosoma (plásmido) presente en el medio (Galván, 1). Se colocó CaCl2 y el plásmido en hielo por alrededor de cinco minutos. Se tomaron dosmicrotubos (uno control y el otro rotulado como PUC19 (+)), se le añadió 250 μl de CaCl2 a cada uno y se colocaron en hielo. Se inoculó cadatubo con cultivo de E. coli DH5α. Al tubo rotulado como PUC (+) se le añadieron 10 μl del plásmido y se agitó con la ayuda de unamicrocentrífuga. Se dejaron reposar los tubos por veinte minutos en hielo. Luego se pasaron por un baño a 42ºC por un minuto y se volvieron acolocar en hielo por cinco minutos más. La restauración es el momento en donde la bacteria está estable y tiene a crecer, por lo que se leañadieron 250 μl de LB a cada tubo. Se dejaron reposar en la incubadora a 37ºC por treinta minutos. Luego del tiempo de incubación, setransfirieron 50 μl del tubo PUC (+) a un plato Petri de LB con ampicilina y del tubo control se transfirió la misma cantidad a un platoPetri de LB y otra porción a otro plato Petri de LB con ampicilina. Se sellaron los platos y se dejaron incubando a 37ºC por 24 horas. 12