MATERIALES Y M TODOS
Páginas: 3 (585 palabras)
Publicado: 15 de junio de 2015
MATERIALES Y MÉTODOS
Microorganismos: Se utilizó para este estudio Corynebacterium glutamicum AJ1510 obtenido de la empresa Ajinomoto.
Medios de cultivo
- Medio de sal mínima (HSH) que contiene: 1g; KH2PO4, 0,6 g; K2 HPO4, 1 g; (NH) 2 SO4, 0,5 g; MgSO4 0,7 H2O. En 1 litro de agua destilada. El pH del medio se ajustó a 7-7,5.
-El medio de mantenimiento (g / l): extracto de carne, 10, peptona,10; NaCl, 5, agar 20, pH ajustado a 7.
-Medio de fermentación para la producción de ácido L-glutámico por C. glutamicum, células se cultivaron en medio sal basal (BS) por litro. El medio de salbasal contenía lo siguiente: 5 g, (NH4) 2SO4, 5 g, urea, 2 g, KH2PO4, 2 g, K2HPO4, 0,25 g, MgSO4 • 7H2O, 0,01 g, FeSO4 • 7H2O, 0,01 g, MnSO4 • 5H2O , 0,01 g, CaCl2 • 2H2O, 0,03 mg, ZnSO4 • 7H2O, 0,1 mg,H3BO4, 0,07 mg, CoCl2 • 6H2O, 0,03 mg, CuCl2 • 2H2O, 0,01 mg, NiCl2, 0,1 mg de NaMo2O4 • 2H2O, diferentes concentraciones de jarabe, y 200 ml de biotina (pH 7,0). Cincuenta mililitros (50 ml) de mediosde fermentación se añadieron a los matraces (250 ml). Para cada matraz, se añadieron 1 ml de inóculos de un cultivo de 24 h de edad y se incubaron en un agitador rotatorio a 150 rpm a 31 ° C.
-Medio de mutación (MI) que contenía (g / L): 10, glucosa; 3, extracto de levadura; 3, extracto de peptona; 5, extracto de malta; 15, agar.
Cromatografía
La cromatografía en papel para identificación delos monosacáridos y oligosacáridos para los jarabes no tratados, alcalinos y ácidos se procedió mediante la técnica cromatográfica en papel Whatman No. 1, y el disolvente n-butanol: ácido acético:agua (60:15:25 v / v) durante un período de 48 h. El cromatograma se seca, luego se sumerge en -AgNO3 alcalino.
Estimación de ácido glutámico mediante cromatografía fina
El contenido de ácidoglutámico en el caldo después de la fermentación se estimó por cromatografía fina utilizando gel de sílice G y la mezcla de disolventes de n-butanol, ácido acético glacial y agua en la relación de 4: 1: 1...
Microorganismos: Se utilizó para este estudio Corynebacterium glutamicum AJ1510 obtenido de la empresa Ajinomoto.
Medios de cultivo
- Medio de sal mínima (HSH) que contiene: 1g; KH2PO4, 0,6 g; K2 HPO4, 1 g; (NH) 2 SO4, 0,5 g; MgSO4 0,7 H2O. En 1 litro de agua destilada. El pH del medio se ajustó a 7-7,5.
-El medio de mantenimiento (g / l): extracto de carne, 10, peptona,10; NaCl, 5, agar 20, pH ajustado a 7.
-Medio de fermentación para la producción de ácido L-glutámico por C. glutamicum, células se cultivaron en medio sal basal (BS) por litro. El medio de salbasal contenía lo siguiente: 5 g, (NH4) 2SO4, 5 g, urea, 2 g, KH2PO4, 2 g, K2HPO4, 0,25 g, MgSO4 • 7H2O, 0,01 g, FeSO4 • 7H2O, 0,01 g, MnSO4 • 5H2O , 0,01 g, CaCl2 • 2H2O, 0,03 mg, ZnSO4 • 7H2O, 0,1 mg,H3BO4, 0,07 mg, CoCl2 • 6H2O, 0,03 mg, CuCl2 • 2H2O, 0,01 mg, NiCl2, 0,1 mg de NaMo2O4 • 2H2O, diferentes concentraciones de jarabe, y 200 ml de biotina (pH 7,0). Cincuenta mililitros (50 ml) de mediosde fermentación se añadieron a los matraces (250 ml). Para cada matraz, se añadieron 1 ml de inóculos de un cultivo de 24 h de edad y se incubaron en un agitador rotatorio a 150 rpm a 31 ° C.
-Medio de mutación (MI) que contenía (g / L): 10, glucosa; 3, extracto de levadura; 3, extracto de peptona; 5, extracto de malta; 15, agar.
Cromatografía
La cromatografía en papel para identificación delos monosacáridos y oligosacáridos para los jarabes no tratados, alcalinos y ácidos se procedió mediante la técnica cromatográfica en papel Whatman No. 1, y el disolvente n-butanol: ácido acético:agua (60:15:25 v / v) durante un período de 48 h. El cromatograma se seca, luego se sumerge en -AgNO3 alcalino.
Estimación de ácido glutámico mediante cromatografía fina
El contenido de ácidoglutámico en el caldo después de la fermentación se estimó por cromatografía fina utilizando gel de sílice G y la mezcla de disolventes de n-butanol, ácido acético glacial y agua en la relación de 4: 1: 1...
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