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Páginas: 7 (1684 palabras)
Publicado: 20 de julio de 2014
Microscopía
Inicio
LA MICROSCOPÍA:
Introducción
HERRAMIENTA PARA ESTUDIAR CÉLULAS Y TEJIDOS
Capítulo 1:
Limitaciones para el estudio
de células y tejidos
Capítulo 2:
Nociones básicas de óptica
Capítulo 3:
La imagen. Sistemas ópticos
CAPÍTULO 6
TÉCNICAS ESPECIALES DE MICROSCOPÍA
6.1.-Microscopio de campo oscuro
6.2.-Microscopio de contraste de faseCapítulo 4:
El microscopio compuesto
6.3.-Microscopio de luz polarizada
Capítulo 5:
El microscopio electrónico
6.4.-Microscopio de contraste por interferencia diferencial
6.5.-Microscopio de fluorescencia
Capítulo 6:
Técnicas especiales de
microscopía
Capítulo 7:
Nuevas tendencias
Conclusiones
Bibliografía
Anexos
6.6.-Microscopio de luz ultravioleta
6.7.-Microscopio confocal: O Microscopio láser de barrido
En la microscopía fotónica clásica el tejido debe cortarse finamente para ser
examinado y mientras más delgado sea, más nítida será la imagen; pero con este
método se pierde la información tridimensional durante el corte. Si una muestra
gruesa es observada al microscopio fotónico, la imagen que se enfoca se ve
contaminada por lasuperposición de los elementos del tejido que están fuera de
foco, tanto por encima como por debajo del plano enfocado; la imagen enfocada se
deteriora a causa de las estructuras superpuestas borrosas o no enfocadas.
Con el microscopio confocal estas limitaciones han sido superadas, ya que es un
instrumento que permite realizar cortes ópticos finos a muestras de tejidos más o
menos gruesos y realizarreconstrucciones en tres dimensiones a partir de cortes
seriados. Fue inventado en el año 1955 por el científico estadounidense Marvin
Minsky (116) al estudiar neuronas. Su mecanismo, basado en el microscopio de
fluorescencia hace posible la obtención de imágenes de la arquitectura
tridimensional de células y tejidos.
Los detalles de la óptica del microscopio confocal son complejos ycomplementado
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo6_7.htm[18/07/2014 07:38:03 p.m.]
Microscopía
por métodos electrónicos y de computación, este instrumento permite enfocar
únicamente un plano determinado del espécimen, eliminando la luz (fluorescencia)
procedente de las regiones que no están en el plano de enfoque (fig. 6-25).
Figura 6-25.- Comparaciónentre dos micrografías de una célula en mitosis,
contrastada con un doble marcaje fluorescente, tanto para los cromosomas (verde)
y la actina (rojo). A la izquierda se aprecia una imagen donde la profundidad de
campo abarca prácticamente todo el espesor de la célula y en consecuencia la
imagen se ve un tanto borrosa a pesar de estar enfocada. A la derecha se observa
una imagen obtenida conel principio confocal, que consiste en un corte óptico de
la célula donde se captura la fluorescencia que proviene exclusivamente de las
estructuras que están en el plano de enfoque, obteniéndose una imagen más
nítida. Tomado de Laser Scanning Confocal Microscopy. The Imaging Technology Group (117).
Este microscopio tiene mucho éxito en el mundo científico gracias a la alta calidad
de lasimágenes que proporciona a partir de especímenes preparados con las
técnicas de laboratorio habituales para la microscopía de fluorescencia y por
supuesto, al creciente número de aplicaciones.
6.7.1.-Ventajas del microscopio confocal
• Uso de la fluorescencia (epi-fluorescencia).
• Enfoca un solo plano del espécimen.
• Elimina la información proveniente de otros planos no enfocados delespécimen.
• Obtención de cortes ópticos seriados a partir de muestras con cierto grosor o
cuyo corte fino se dificulta.
• Gracias a programas de computación, se combinan los cortes ópticos seriados y
a partir de ellos se reconstruye en tres dimensiones la estructura observada.
6.7.2.-Principio de la microscopía confocal
El microscopio confocal añade el principio de iluminar el...
Inicio
LA MICROSCOPÍA:
Introducción
HERRAMIENTA PARA ESTUDIAR CÉLULAS Y TEJIDOS
Capítulo 1:
Limitaciones para el estudio
de células y tejidos
Capítulo 2:
Nociones básicas de óptica
Capítulo 3:
La imagen. Sistemas ópticos
CAPÍTULO 6
TÉCNICAS ESPECIALES DE MICROSCOPÍA
6.1.-Microscopio de campo oscuro
6.2.-Microscopio de contraste de faseCapítulo 4:
El microscopio compuesto
6.3.-Microscopio de luz polarizada
Capítulo 5:
El microscopio electrónico
6.4.-Microscopio de contraste por interferencia diferencial
6.5.-Microscopio de fluorescencia
Capítulo 6:
Técnicas especiales de
microscopía
Capítulo 7:
Nuevas tendencias
Conclusiones
Bibliografía
Anexos
6.6.-Microscopio de luz ultravioleta
6.7.-Microscopio confocal: O Microscopio láser de barrido
En la microscopía fotónica clásica el tejido debe cortarse finamente para ser
examinado y mientras más delgado sea, más nítida será la imagen; pero con este
método se pierde la información tridimensional durante el corte. Si una muestra
gruesa es observada al microscopio fotónico, la imagen que se enfoca se ve
contaminada por lasuperposición de los elementos del tejido que están fuera de
foco, tanto por encima como por debajo del plano enfocado; la imagen enfocada se
deteriora a causa de las estructuras superpuestas borrosas o no enfocadas.
Con el microscopio confocal estas limitaciones han sido superadas, ya que es un
instrumento que permite realizar cortes ópticos finos a muestras de tejidos más o
menos gruesos y realizarreconstrucciones en tres dimensiones a partir de cortes
seriados. Fue inventado en el año 1955 por el científico estadounidense Marvin
Minsky (116) al estudiar neuronas. Su mecanismo, basado en el microscopio de
fluorescencia hace posible la obtención de imágenes de la arquitectura
tridimensional de células y tejidos.
Los detalles de la óptica del microscopio confocal son complejos ycomplementado
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo6_7.htm[18/07/2014 07:38:03 p.m.]
Microscopía
por métodos electrónicos y de computación, este instrumento permite enfocar
únicamente un plano determinado del espécimen, eliminando la luz (fluorescencia)
procedente de las regiones que no están en el plano de enfoque (fig. 6-25).
Figura 6-25.- Comparaciónentre dos micrografías de una célula en mitosis,
contrastada con un doble marcaje fluorescente, tanto para los cromosomas (verde)
y la actina (rojo). A la izquierda se aprecia una imagen donde la profundidad de
campo abarca prácticamente todo el espesor de la célula y en consecuencia la
imagen se ve un tanto borrosa a pesar de estar enfocada. A la derecha se observa
una imagen obtenida conel principio confocal, que consiste en un corte óptico de
la célula donde se captura la fluorescencia que proviene exclusivamente de las
estructuras que están en el plano de enfoque, obteniéndose una imagen más
nítida. Tomado de Laser Scanning Confocal Microscopy. The Imaging Technology Group (117).
Este microscopio tiene mucho éxito en el mundo científico gracias a la alta calidad
de lasimágenes que proporciona a partir de especímenes preparados con las
técnicas de laboratorio habituales para la microscopía de fluorescencia y por
supuesto, al creciente número de aplicaciones.
6.7.1.-Ventajas del microscopio confocal
• Uso de la fluorescencia (epi-fluorescencia).
• Enfoca un solo plano del espécimen.
• Elimina la información proveniente de otros planos no enfocados delespécimen.
• Obtención de cortes ópticos seriados a partir de muestras con cierto grosor o
cuyo corte fino se dificulta.
• Gracias a programas de computación, se combinan los cortes ópticos seriados y
a partir de ellos se reconstruye en tres dimensiones la estructura observada.
6.7.2.-Principio de la microscopía confocal
El microscopio confocal añade el principio de iluminar el...
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