Medición de Homocisteína


UNIVERSIDAD AUTONOMA DE GUADALAJARA
BIOQUIMICA II

“EVALUACION DE UN NUEVO METODO ENZIMATICO PARA LA MEDICION DE HOMOCISTEINA”



OBJETIVO.
Se pretende hacer una comparación entre losresultados que arrojan los métodos enzimáticos basados en el uso de tres reacciones enzimáticas acopladas (cistationina sintasa, cistationina liasa y lactato deshidrogenasa) con los resultadosarrojados en las evaluaciones con HPLC Y métodos enzimáticos de referencia. Lo anterior con el fin de conocer el mejor método para medir niveles de homocisteína

INTRODUCCION.
La homocisteína es unaminoácido azufrado que se forma normalmente a partir de la metionina durante el cumplimiento de su función de donante de grupos metilos. Se produce una interesante interrelación entre cofactores derivadosde vitaminas como ácido fólico, B12, B6, B2. La eficiencia de estas reacciones se puede obtener de los niveles de homocisteína en plasma.
Altos niveles de homocisteína se relaciona con riesgo deenfermedades cardiovasculares.

PACIENTES.
170 muestras de plasma de personas aparentemente saludables fueron analizadas para evaluar el total de homocisteína en un analizador químico automático yestos resultados fueron comparados con el método de HPLC de referencia y también se comparó con un método inmunoenzimatico también de referencia
Las muestras se centrifugaron y se almacenaron a-80ºC, después de dehieladas las muestras se analizaron por los 3 métodos en el mismo día

METODOS.
HPLC: La homocisteína total fue medida de acuerdo al método de Araki y Sako con algunasmodificaciones. El método es lineal hasta 10mM
Método inmunoenzimatico fluorescente: Fueron realizados de acuerdo a las recomendaciones de manufactura, donde la concentración es cuantificada por la intensidad dela luz fluorescente polarizada
Método enzimático espectrofotométrico: El decremento de la absorbancia a 340 nm es proporcional a la cantidad de NAD formado y a la concentración de homocisteína...