medicina veterinaria/ biologia

Discusión:
Para extraer los ácidos nucleicos del material biológico es preciso provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas celulares y separar los ácidos nucleicos de los restos decélulas. El procedimiento de lisis idóneo suele consistir en un equilibrio de técnicas y ha de ser suficientemente fuerte para romper el material inicial complejo (un tejido, por ejemplo), perosuficientemente suave para preservar el ácido nucleico diana. Entre los procedimientos usuales de lisis figuran los siguientes:
• Rotura mecánica (trituración, lisis hipotónica, etc.);
• Tratamiento químico(detergentes, agentes caotrópicos, reducción con tioles,
etc.);
• Digestión enzimática (Proteinasa K, etc.).
Es posible romper la membrana celular e inactivar las nucleasas intracelulares almismo tiempo. Por ejemplo, una misma solución puede contener detergentes que solubilicen las membranas celulares y sales caotrópicas fuertes que inactiven las enzimas intracelulares. Tras la lisiscelular y la inactivación de las nucleasas, los restos de células se eliminan fácilmente por filtración o precipitación.

Entre los métodos más populares de la extracción del ADN se encuentran elsalting-out, el chelex y el fenol cloroformo.
Fenol cloroformo: técnica organica(solventes), adn en muy buena cantidad y calidad, péptidos y proteínas son extraidas en la fase organica (fenol), después se realiza digestión con proteinasa k. el cloroformo permite que todo el fenolpueda ser lavado.
Desventajas: reactivos altamente tóxicos y pérdidas significativas de adn y mucho mas si esta degradado.
Chelex:técnica inorgánica, previene la degradación del ADN por quelacion de los iones metálicos durante la ebullición al 5%...