Medicion RET

Métodos de análisis especiales

Medición de RET en células epiteliales CACO tratadas con E. histolytica y EhCP112
Introducción
Las células epiteliales y endoteliales están unidas unas con otras através de uniones intercelulares importantes para la formación y mantenimiento de los tejidos, así como para realizar sus funciones de manera correcta. Dichas funciones están integradas porcomponentes transmembranales, que a su vez interactúan con componentes del citoesqueleto y proteínas accesorias intracelulares, que pueden, dependiendo del tipo celular y a su vez tisular, mediar el transportede moléculas e iones de manera transcelular y paracelular. En los epitelios, las uniones ocluyentes son las formas de unión más apicales, formando una estructura que rodea todo el perímetro celular,formando un “puente” entre los lados apicales y basolaterales, regulando la difusión de moléculas a través de la vía parecelular.
EhCP112 es un polipéptido de Entamoeba histolytica (112 KDa)perteneciente a un complejo de dos proteínas denominado EhCPADH, caracterizado por participar en la adherencia (EhADH112) y como cisteín-proteasa (EhCP112), que en su conjunto participan en la virulencia delparasito. La proteína EhCP112 también tiene un dominio denominado RGD, que se cree interactúa con integrinas y degrada otros componentes de matriz extracelular.
Objetivo
Medir el efecto de laproteína EhCP112 bloqueada con anticuerpos sobre la resistencia eléctrica transepitelial en monocapas de células epiteliales CACO, y discernir su participación en el aumento de la permeabilidadparacelular ejercida por E. histolytica.
Materiales y métodos
Se ajusto la proporción de células y trofozoítos en relación 1:1, utilizando para cada ensayo una cantidad de 25,000 trofozoítos. Se contaron lasamebas en una cámara de Neubauer con 1 ml de medio, cuantificándose una media de 35 células por cuadrante, obteniéndose un conteo final de 35,000 células por ml de medio; con este valor, se obtuvo...