Mediciones con cinta

La PCR específica de metilación (MSP) es la técnica más utilizada para estudiar la metilación de islas CpG, que son muy comunes en los promotores de muchos genes. Las citosinas de las islas CpG seencuentran normalmente desmetiladas en tejidos normales pero se metilan en promotores de genes implicados en procesos celulares anormales como el cáncer (Esteller et al. 2001). La PCR específica demetilación (Hermanet al. 1996) es una de las técnicas más eficaces para estudiar los perfiles de metilación de estas regiones. Las diferencias obtenidas entre alelos metilados y desmetilados al tratar conbisulfito sódico son la base de la PCR específica de metilación y son especialmente útiles para el estudio de islas CpG por la abundancia de sitios CpG que contienen.
El diseño de primers es uno delos pasos más complejos y críticos de la MSP. Las hebras de DNA modificadas con bisulfito dejan de ser complementarias por lo que se deben diseñar primers específicos para cada una. La gransensibilidad de esta técnica permite determinar el estado de metilación de muestras pequeñas de DNA, incluyendo muestras provenientes de tejidos embebidos en parafina o microdiseccionados (Herman et al. 1996).No obstante, determinar la metilación al nivel de nucleótido requiere la secuenciación de los productos de PCR, la obtención de datos cuantitativos y la identificación de heterogeneidad celular enpoblaciones aún no es posible con esta técnica.
La versatilidad de la PCR específica de metilación permite que sea utilizada como una herramienta clínica rápida para la evaluación inicial en grancantidad de pacientes con enfermedades específicas dependientes de alelo. Por ejemplo, la PCR específica de metilación es utilizada en la actualidad para evaluar el estado de metilación . a metilación delADN consiste en la transferencia de grupos metilos (-CH3) a algunas de las bases citosinas (C) del ADN situadas previa y contiguamente a una guanina (G). Estas islas CpG son regiones entre 0.5 y 5.5...