Mediciones Convencionales De Bilirrubinas Vitros

La medición de las fracciones de la bilirrubina en química seca

Lic. Jorge Santiago

Históricamente, desde hace más de 70 años, las fracciones de la bilirrubina se han medido de la misma manera, mediante una reacción en medio líquido: la reacción de Jendrassik-Groff.

En esta reacción se enfrenta a la molécula de bilirrubina con NO2Na y ácido sulfanílico, produciéndose una sal de diazoniola que da como resultado dos moléculas isoméricas y coloreadas: las azobilirrubinas.

Las fracciones de la bilirrubina que reaccionan espontáneamente con el reactivo de Jendrassik conforman la bilirrubina directa (DBIL), mientras que las que no reaccionan de una manera espontánea forman la bilirrubina indirecta (IBIL).

Por lo tanto:

TBIL = IBIL + DBIL

Donde:

TBIL = Bilirrubinatotal
IBIL = Bilirrubina indirecta
y DBIL = Bilirrubina directa

Cuando se realizaron estudios de HPLC (Cromatografía Líquida de Alta Presión) se encontró que la bilirrubina total estaba formada por tres fracciones: la bilirrubina no conjugada (Bu), la bilirrubina conjugada (Bc) y una fracción que fue llamada bilirrubina delta (δBIL).

Estas diferentes fracciones presentan lassiguientes características:

Bu (Bilirrubina no conjugada):
Esta fracción representa la forma habitual en que la bilirrubina circula en el torrente sanguíneo, proveniente de la degradación de la hemoglobina. En esta fracción la molécula de bilirrubina se encuentra débilmente unida a albúmina.

Bc (Bilirrubina conjugada):
Se encuentra en pacientes normales en forma intrahepática. La Bc es laconjugación de la molécula de bilirrubina con el ácido glucorónico y se presenta en dos formas, mono y di conjugada.

δBIL (Bilirrubina delta):
En la δBIL la molécula de bilirrubina está nuevamente unida a albúmina pero en este caso mediante una unión de tipo covalente. Existe evidencia experimental de que la δBIL proviene directamente de la Bc mediante una reacción no enzimática.

¿Cómo se comportanen realidad estas fracciones frente al reactivo de Jendrassik?
La Bu no es capaz de reaccionar con el reactivo espontáneamente y equivale entonces a la bilirrubina indirecta, mientras que la Bc y la δBIL, reaccionan en forma espontánea (la δBIL reacciona espontáneamente en un 85%) y corresponden, por lo tanto, a la bilirrubina directa.

De acuerdo a ésto:

TBIL = Bu + Bc + δBIL

Donde:TBIL = Bilirrubina total
Bu = Bilirrubina no conjugada
Bc = Bilirrubina conjugada
y δBIL = Bilirrubina delta

pudiéndose plantear por consiguiente las siguientes equivalencias:

IBIL = Bu (reacción no espontánea)
y
DBIL = Bc + δBIL (reacción espontánea)

Repasemos brevemente como es el metabolismo de la bilirrubina. Como sabemos la molécula de bilirrubinaproviene de la degradación de la hemoglobina. La forma habitual de circulación en suero de la bilirrubina es la Bu, es decir débilmente unida a albúmina. Para su eliminación la Bu es captada por el hígado. Justo antes de esta captación la molécula de bilirrubina se separa de la albúmina e ingresa al hígado.
En los hepatocitos, y mediante una reacción mediada por una enzima, la glucoroniltransferasa, se conjuga con el ácido glucorórico para formar la Bc y de esta forma es excretada a través de los ductos biliares. Como vimos, la δBIL proviene directamente de la Bc.

La concentración de bilirrubina en el suero es, por lo tanto, un balance entre su síntesis y su eliminación.

De acuerdo a este esquema metabólico, un aumento en la Bu nos estaría indicando un aumento en la producción debilirrubina, por ejemplo por una patología de tipo hemolítico, o bien una mala captación por parte del hígado.
Un aumento en la Bc, en cambio, nos estaría indicando una deficiencia en su eliminación, debida, por ejemplo, a una obstrucción de los ductos biliares.

Es importante notar que la concentración teórica de Bc en suero en un paciente normal, es decir sin patología obstructiva, debería...