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CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS MEDIANTE LA TECNICA SDS – PAGE Y
CUANTIFICACIÓN POR EL MÉTODO DE BRADFORD.
1- INTRODUCCIÓN
Las proteínas son biomoléculas (> 10.000 dalton) de enorme importancia en los tejidos
vegetales y animales. Las proteínas están formadas por secuencias de aminoácidos unidos por
enlaces peptídicos y provistas de una estructura tridimensional compleja.
El enlace químico quemantiene unidos los constituyente aminoacídicos de las cadenas
polipeptídicas es un enlace amida, desde este punto de vista las proteínas pueden considerarse
como poliamidas de alto peso molecular. Esta unión entre aminoácidos se conoce como enlace
peptídico, de ahí que las cadenas de aminoácidos que constituyen una proteína se denominan
cadenas polipeptídicas.
El grado de organizaciónestructural de las proteínas es muy complejo y cada uno de ellos es
dependiente del que lo precede. Brevemente, Configuración Primaria (estructura covalente);
determinada por el orden o secuencia de unión de los aminoácidos. Configuración Secundaria;
describe el primer grado de plegamiento de la cadena polipeptídica, considerando la disposición en
el espacio sin tomar en cuenta la disposición delas cadenas laterales (R) de los residuos de
aminoácidos. Configuración Terciaria; descripción del segundo grado de plegamiento de la cadena
polipeptídica, otorgándole a la proteína forma tridimensional en el espacio y una superficie exterior
característica. Está condicionada por la configuración secundaria y la naturaleza de las cadenas
laterales de los residuos de aminoácidos ( α hélice, hojaplegada β). Figura1

Figura 1: Organización en niveles de estructura de las proteínas

Las propiedades biológicas de las proteínas dependen de la integridad de sus estructuras. Cuando
éstas son alteradas, aunque no haya ruptura de los enlaces peptídicos y puentes disulfuro, la
proteína pierde sus propiedades funcionales, físicas y químicas que las caracterizan. Este proceso se
denominadesnaturalización, y corresponde básicamente, a la pérdida parcial o total de su
configuración terciaria. Los agentes desnaturalizantes como los ácidos fuertes (clorhídrico,
tricloroacético, perclórico.), álcalis fuertes (hidróxido de sodio, potasio.), el calor mantenido por
sobre 50 ºC y una serie de agentes químicos más específicos (urea, β-mercaptoetanol, Dodecil
sulfato de sodio, etc.) alteranlas configuración secundarias y terciarias de las proteínas.

Elaborado por el grupo de Química y Bioquímica de la Facultad de Ciencias Silvoagropecuarias de
la Universidad Mayor.

Las proteínas desnaturalizadas presentan una menor solubilidad y habitualmente originan un
precipitado. La exploración de las propiedades y funciones de las proteínas a través del uso de
técnicas químicas yfísicas, han aumentado los conocimientos sobre las bases moleculares de la vida.
Mediante el uso de la electroforesis (estudio de movilidad) en gel se puede separar y caracterizar
una proteína, previa cuantificación de la misma. En la práctica bioquímica se requiere la rápida
medida de pequeñas cantidades de proteína. La literatura contiene muchos procedimientos para la
cuantificación de proteínasen solución, basados en la medición espectrofotométrica de la
formación de un producto coloreado.
La electroforesis es el estudio del movimiento de las moléculas cargadas en un campo eléctrico. La
técnica, la cual ha sido usada por los bioquímicos hace más de 50 años atrás, es especialmente
aplicable en la caracterización y análisis de polímeros biológicos. La migración en un campo eléctricoestá influenciado por el tamaño, forma, carga y naturaleza química de la molécula. La velocidad (v)
de migración de una proteína (o cualquier otra molécula) en un campo eléctrico depende de la
fuerza del campo (E), de la carga neta de la proteína (Z) y del coeficiente de fricción (f).

v= E Z
f
La fuerza eléctrica E Z que conduce la molécula cargada hacia el electrodo con signo opuesto...