Medios De Cultivo Para Hongos

TECNICAS DE AISLAMIENTO

El hongo patógeno debe ser aislado de otro microorganismo. Para las levaduras se pueden agregar dos gotas de una mezcla de penicilina estreptomicina o emplear medios que contengan cloranfenicol.
En hongos filamentosos, deben eliminarse las bacterias saprofitas al colocar la muestra antes de sembrarla en líquido de Raulin , también es posible ubicar la muestra en unasolución con antibiótico antibacteriano, o bien situar dos tubos de a mezcla de antibióticos en el medio de cultivo.
Para los hongos saprofitos es más fácil eliminarlos, para esto es factible incubar a 30 a 37ºC si se emplean tubos con tapón de rosca deben estar flojos para permitir la entrada de aire

Las técnicas de aislamiento para sólidos, líquidos y ambiente.
Es una técnica de dilución yvaciado en placa para sustratos líquidos o sólidos muy contaminados.
En el sembrado el procesamiento debe ser inmediato muchas muestras se pueden sembrar tras su recolección. En caso de líquidos la muestra procesada de exudados vaginales, agitar la torunda en 0.5ml de agua y sembrar. Cuando son cepillados bronquiales hay que mezclar con agua destilada y sembrar en más de 1 ml. en caso de serlíquidos corporales se deberán tomar más de 2ml.
La técnica de dilución es también útil para el aislamiento de los hongos en los productos agrícolas, pero a veces conviene sembrar el inoculo tomado directamente de la superficie de material en estudio. En otros casos se depositan sobre el medio los granos o trozos de muestra, previamente desinfectados por inmersión sucesiva en etanol 70% v/v y en unasolución al 10% v/v de agua lavandina concentrada durante 2 minutos, y enjuagados una vez con agua estéril.
Para la técnica de diluciones se hace lo siguiente.
Preparar cierto número de tubos con 10 o 15 ml. de Sabouraud dextrosa agar.
Colocar los tubos en agua hirviendo para fundir el medio de cultivo, colocar los tubos con el medio fundido en un baño de agua regulado a 45ºC tomar una pequeñamuestra de suelo o de un cultivo contaminado que se desee aislar. Introducir con un asa unos trozos de la muestra en uno de los tubos con el medio de cultivo fundido.
Rotar enérgicamente el tubo, evitando la formación de burbujas, verter el contenido en una caja petri estéril verter el contenido de otro tubo en el primer tubo y mezclar verter este en otra caja petri, verter el contenido de untercer tubo en el primero y volver a verter en otra caja petri, continuar hasta obtener 5 cajas, ya solidificado el medio incubar durante 3 a 5 días a 28ºC verificar la pureza de las colonias desarrolladas en las ultimas 2 cajas

Aislamiento por placa Warcup.
Verter en una caja petri estéril 8-10 ml de Czapek Dox agar con 0.5% de extracto de levadura acidificada con ácido fosfórico con un pH de4.0
Agregar con un aza micológica antes de que solidifique 0.005-0.015 g de muestra de suelo rotar y agitar la caja levemente con el medio aun fundido para dispersar las partículas de suelo incubar de 3-5 días a 26-28ºC.

Recuento
Se hace una dilución seriada con el mismo diluyente, agitando continuamente el líquido y transfiriendo con rapidez las alícuotas para evitar la sedimentación de losesporos o células. Se deposita 0,1 mL de cada dilución en la superficie de una placa de medio vaciada en una caja de Petri de 9 cm de diámetro, y se extiende por la superficie con una fina varilla de vidrio doblada en ángulo. Se incuba dentro de una bolsa plástica acompañada de un vaso con agua para evitar la desecación, durante 3 a 7 días a 25°C en las regiones subtropicales, a 30°C en lastropicales y a 22°C en las templadas.

CULTIVOS PUROS
Un cultivo puro de levaduras se obtiene dispersando el material tomado de la colonia a estudiar, mediante estrías sucesivas sobre la placa de medio. En cambio, un cultivo puro de mohos se obtiene por repique de un pequeño manojo de hifas o grumo de esporos en varios puntos de la placa de medio selectivo. En algunos casos esta técnica no es...