Medios De Cultivo Trabajo De Laboratorio

UNIVERSIDAD DE PANAMÁ
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE TECNOLOGÍA MÉDICA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

CURSO DE MICROBIOLOGIA 360A

PROCEDIMIENTO NORMATIZADO DE TRABAJO PARA LA PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS
AGAR SANGRE Y AGAR BHI



Introducción

Por su minúsculo tamaño los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, si no que es necesario manejarlos como poblaciones. Paraello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicación in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de su hábitats naturales.
En estos ambientes se debe eliminar a todos aquellos microorganismos que interfieren el estudio del microorganismo de interés, que al que además de proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento,multiplicación.

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.Objetivos y Alcance
Unos de los principales objetivos de esta práctica es conocer la elaboración de un medio de cultivo y como llevarla a cabo.
Para este procedimiento se obtendrá medios de cultivos: Agar Sangre y Agar BHI (Brain Heart Infusion)
Agar Sangre: es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemolisis (alpha, beta y gama). Se utiliza parael crecimiento de estreptococos. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes pero si puede añadir factores inhibidores del crecimientobacteriano presente en el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolábiles. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo, humana), puesfacilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no posen sustancias inhibidoras de crecimiento de determinados gérmenes.
Agar BHI: Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusión de cerebro de ternera, la infusión de corazón vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrógeno, y vitaminas. La glucosaes el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el fosfato disódico otorga capacidad buffer. El agar es el agente solidificante.
El agar cerebro corazón (BHI) mantiene los mismos principios que el caldo para el cultivo de estreptococos y otras bacterias exigentes.

Reactivos

Esterilización y Almacenamiento de los Medios de Cultivo
La esterilizaciónes un proceso a través del que se puede lograr la destrucción total de los microorganismos viables presentes en un determinado material.
Clasificación de métodos de esterilización:
1. Agentes Físicos:
* Esterilización por calor: El calor es el método de elección para esterilizar el material de laboratorio resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos paraesterilizar un material dependende que se esté utilizando calor seco o calor húmedo.
-Esterilización con calor seco: La acción bactericida del calor seco se debe a la oxidación física de un procedimiento lento o coagulación de la proteína bacteriana por quemadura. En ausencia de humedad se necesita una temperatura más alta ya que en esta forma los microbios son destruidos al absorber el calor....