Medios De Cultivo

UNIVERSIDAD AUTONOMA “BENITO JUAREZ” DE OAXACA
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
LICENCIATURA EN MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA  

Bacteriología y Micología Veterinaria  

 

Preparacion de Medios de cultivo


 

Profesor:
Mvz: Gil Cruz Martínez

MATERIALES Y SUSTANCIAS
* Matraz
* Sangre (Ganado bovino)
* Papel aluminio
* Base para agar sangre
* Aguadestilada
* Auto clave
* Asas de platino
* Estufa
* Mechero de bunsen
* Leche con mastitis (bovino)
* Agar sangre
* Balanza granaditaria
* Pipeta
* Algodón

PREPARACION DE CULTIVO AGAR SANGRE Y MC KONKEY

AUTO CLAVE: Sirve para esterilizar materiales del laboratorio. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua perorestringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados. Un tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15-20 minutos.

PASOS PARA LA BASE DE AGAR SANGRE:

1.- Esterilizar mesas de trabajo. Esto se hace con una franela limpia y una con jabón.

2.- Esterilizar las cajas de Petri. Estoconsiste en lavar las cajas de Petri, envolviéndolas en un cuarto de pliego de papel de estraza y después se meten al autoclave hasta 121°C.

3.- Se procede a preparar el medio de cultivo (agar sangre). Para prepararlo, se debe tomar en
cuenta que en esta práctica son 8 integrantes, lo que implica que se prepara la mezcla para 8 cajas de Petri con capacidad de 20 ml cada una. Obteniendo comoresultado que se debe de introducir en el matraz 240 ml De agua destilada, agregándole 14.52 gr de agar. El agar se pesa en la balanza, la balanza debe de estar nivelada antes de pesar. Primeramente se pesa el molde en que se vaya a introducir el agar para pesarse, en este caso se uso papel aluminio en forma cilíndrica.

4.- Una vez mezclados, Se calienta el matraz con el mechero de bunsey porun minuto a 96°c. Esto se hace con mucho cuidado ya que suele a calentarse demasiado y tiende a hervir a 96° dependiendo de la altura. Cuando veamos que empieza esta reacción, retirarlo del fuego y acercarlo a una llave de agua para evitar quemaduras en la piel.

5.- Después introducimos el matraz ya con la solución y los anteriores pasos realizados a la autoclave a una temperatura de 121 ° Ccon 15 libras de presión con un tiempo de 15 minutos.

6.- Se sacan las cajas de Petri del autoclave y se lavan. Se vuelven a introducir al autoclave para esterilizarlas hasta 121°C y se le dan 15 minutos.
NOTA: Se pueden meter el matraz y las cajas ya lavadas juntos al autoclave.

7.- Pasando los 15 minutos se descomprime el autoclave, sacamos los matraces y las cajas de Petri del autoclave ydejamos que la sustancia del matraz se enfrié hasta 45°c. Posteriormente cerca del fuego, agregamos la sangre estéril de bovino hasta que la mezcla tome un color rojo tomate y se tapa rápidamente con el tapón de gasa o algodon y un coporucho de papel cerca del mechero.

8.- Después de agregar la sangre, se guarda la bolsa en el refrigerador para un nuevo posible uso.

9.- Las cajas de Petrise ponen en la mesa con la tapa hacia abajo para trabajar con comodidad en el vaciado.

10.- Preparamos el medio de cultivo, introduciendo el agar sangre del matraz (aproximadamente 20 ml) en la caja de Petri ya esterilizadas.

11.- Se toma la caja de Petri con la mano izquierda dejando la caja entre el menique y utilizando solamente el pulgar para abrir la caja, con la mano derecha se quitael tapón del matraz utilizando el menique y con los dedos restantes vaciar la solución calculando únicamente lo correspondiente, tapar el matraz con el tapón no alejándolo del mechero, poner la caja en la orilla de la mesa y deslizarlo cerca del mechero.

12.- Esto se debe de hacer cerca del mechero de bunsen, para evitar contaminación y factores
que desfavorezcan el medio de cultivo. Se...