MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO
Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposiblediferenciarlas sólo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios contienen:
1. Un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente.
2. Otras veces el medio decultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias.
3. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.
4. Conotros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: así, algunas bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos) producen hemólisis y cambios apreciables macroscópicamente en las placas de agar-sangre.
MANTENCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO DESHIDRATADOS
Los medios de cultivo deshidratados deben mantenerse enlugar seco y oscuro, a una temperatura aproximadamente de 15 ° C a 25 °C, en frascos bien cerrados para evitar la entrada de humedad, ya que la absorción de agua lleva a una alteración del pH y eventualmente a formación de precipitados. Duran 5 años app.
ESTERILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
La esterilización puede hacerse por autoclave o por filtración, la mayoría de los medios sonautoclavados a 121° C por 15 minutos (500 cc), volúmenes más grandes pueden necesitar de 20 a 30 minutos o más. Los medios de cultivo deben sacarse de inmediato de la autoclave y enfriarlos rápidamente.
VERTIDO EN PLACAS
Para evitar la formación de gotitas de agua de condensación en la tapa de las placas, debe verterse en ellas el medio de cultivo a una temperatura de 45- 55 °C. Si se producen burbujasse puede pasar la llama del mechero sobre la superficie del agar antes de que éste solidifique. Cuando el agar haya solidificado, dar vuelta las placas
CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Para controlar la esterilidad de las placas preparadas, incubar el 1% de las placas a 36 ° C durante toda la noche (una vez finalizado este control, estas placas deben eliminarse).El control deberíaser visual y por subcultivo. Cada tubo, placa o reactivo preparado debe tener una etiqueta que indique la fecha de preparación. Fijarse para el control en decoloración, turbidez, cambios de color y deshidratación de los medios preparados.
CONSERVACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS
Las placas de agar pueden ser refrigeradas durante una semana sin deteriorarse, pero deberían envolverse enbolsas plásticas o papel para minimizar la pérdida de agua, la que podría afectar a un 7 % de las placas sin envolver por semana. Los medios de cultivo líquidos, deben taparse con un capuchón impermeable al aire. Los medios de cultivo deshidratados exigen protegerse de la luz y del calor en un lugar seco y en un recipiente que debe estar fuertemente cerrado. Normalmente se almacenan a una temperaturainferior a 30º C y algunos de ellos requieren una temperatura de alrededor a 4º C.
ELIMINACIÓN TERMINAL DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEMBRADOS
La eliminación de los cultivos bacterianos deberá efectuarse después de haberse esterilizado en autoclave. Se usan bolsas de alto punto de fusión en las que se coloca el material a esterilizar para luego eliminarlas
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE...