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Manual de laboratorio de Biotecnología

NORMAS DE SEGURIDAD PARA LA UTILIZACIÓN DEL ESPACIO EN PRÁCTICAS DE LABORATORIO

*Use bata de laboratorio para cada práctica y no utilice calzado destapado

*Use guantes, tapaboca, lentes de protección, y máscara con filtros, cuando se requieran.

*No pipetee con la boca, use un pipeteador

*No se lleve los dedos a la boca, ojos o nariz, nirespire directamente sobre ningún reactivo pues sus vapores pueden ser tóxicos

*No ingiera alimentos o bebidas en el laboratorio

*No use durante las prácticas anillos, cadenas, prendedores, pulseras o collares

*No deposite alimentos en las neveras, ni consuma el hielo que allí se produce

*No se admiten en el laboratorio personas que no estén matriculadas en el respectivo curso, por favorno reciba visitas

*No ubique bolsos, tulas, maletines o paquetes, en los lugares de trabajo

UTILIZACIÓN DE REACTIVOS

*Todo reactivo preparado debe rotularse con el nombre del reactivo, la persona que lo preparó y la fecha de preparación

*No arroje por los sumideros ácidos, bases o algún otro reactivo, por favor depositelos en los recipientes de desecho

*Evite derrames de sustanciasen las mesas de trabajo, así se previene que algún compañero se queme la piel o se deteriore la ropa.

*No arroje al piso ningún reactivo

*No arroje al piso papeles u otros elementos. Por favor utilice el recipiente para la basura.

Práctica N. 1:
CULTIVO DE CÉLULAS Y TEJIDOS VEGETALES

INTRODUCCIÓN

El cultivo de tejidos se refiere al cultivo de células, tejidos u órganos de plantasen un medio que le aporte los nutrientes necesarios para su desarrollo. Se parte de la premisa: "toda célula viviente de un organismo multicelular es capaz de desarrollarse si se le dan las condiciones externas apropiadas. La célula tiene la habilidad de desarrollarse, regenerando un organismo entero" (Dodds & Roberts, 1982). La nueva planta será genéticamente idéntica a la planta madre, eldesarrollo de ésta se da en un periodo corto. Al cultivo de tejidos vegetales también se le conoce como cultivo in vitro, cultivo “aséptico”, micropropagación o propagación vegetal in vitro.
 La técnica consiste en tomar una sección de tejido vegetal (explante) y desinfectarlo superficialmente por inmersión total en una solución de hipoclorito de calcio o sodio y en alcohol etílico u otrosdesinfectantes (químicos). Posteriormente el tejido es lavado con agua estéril y éste es sembrado en condiciones asépticas dentro de un recipiente de vidrio que contiene un medio nutritivo que puede ser líquido o semisólido.  Para poder obtener plántulas a partir del tejido, se utiliza un medio nutritivo, que es una especie de gelatina que contiene los nutrientes: vitaminas, macronutrientes, micronutrientes,Fe- EDTA y azúcares, complementando con las fitohormonas o reguladores (auxinas y citoquininas) necesarios para dirigir la formación de las plántulas. La siembra se realiza dentro de una cámara de flujo laminar, que asegura un ambiente aséptico y posteriormente se traslada a una cámara de incubación donde proliferan las células.
En el tratamiento de la célula, tejido u órgano que se desarrollamediante esta técnica, se controlan aspectos como temperatura y fotoperiodo, con el objetivo de crear las condiciones ideales para un rápido desarrollo. Básicamente se deben considerar dos grandes grupos de factores que afectan el correcto desarrollo de la experimentación, que son: la concentración hormonal y el medio de cultivo, considerando siempre que ambas variables son exclusivas para laespecie con que se trabaja.
Concentración hormonal: una fitohormona es un mensajero químico vegetal secretado en un determinado tejido y actúan en el mismo tejido, o en otro distinto de la planta, considerándoselas biocatalizadores junto con enzimas y vitaminas. Las hormonas vegetales pertenecen a cinco grupos cada uno de los cuales exhibe propiedades fuertes de regulación del crecimiento en...