Mesofilos Determinación

INTRODUCCIÓN
Los mesofilos aerobios son microorganismos que necesitan de Oxígeno para desarrollar sus funciones vitales y no viven en temperaturas extremas ya que solo resisten de entre 20ºC y 37ºC.
Dentro de éste grupo se encuentran contemplados las bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 30ºC en condiciones establecidas. Estima la microflora total sin especificar el tipo demicroorganismos.
El conteo de colonias de mesofilos aerobios refleja la calidad sanitaria de un alimento aunque la ausencia de estos no asegura la ausencia de patógenos u toxicidad en un alimento. El conteo de CFU contenidas en una muestra de alimentos sugiere el uso de un medio de cultivo enriquecido con los elementos necesarios para que un microorganismo se desarrolle.
La nutrición microbianaconsiste en suministrar a las células los ingredientes químicos que necesitan para hacer monómeros (constituyentes de las macromoléculas que componen a la célula). Estos compuestos químicos son los nutrientes. Pero para cada organismo es necesario suministrar diferentes tipos de nutrientes y a menudo los requerimientos son específicos. El aporte de nutrientes requiere de macronutrientes en grandescantidades como el Carbono, Nitrógeno y otros como P, S, K, Mg, Ca y Na. Y los micronutrientes que se necesitan en menores cantidades como el Hierro.
El suministro de estos nutrientes en el laboratorio se suministra en Medios de cultivo; los medios de cultivo son soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio para el cultivo de los microorganismos. En microbiología se utilizan dos tiposgenerales de medios de cultivos; los definidos y los complejos (o no definidos). En el caso de esta práctica será un medio definido por que se añaden cantidades precisas purificadas en agua destilada.
Existe una forma de vertido en placa, donde se debe agregar un mililitro de muestra con el agar en forma líquida disuelto y otro en la superficie ya solida del agar. La NOM 093 especifica las prácticasde higiene y sanidad para la manipulación de alimentos.
Dentro de la flora mesofílica aerobia, tendremos: bacilos, cocos, Gram positivos y/o Gram negativos, aislados o agrupados en todas las variedades que nos son familiares.
La utilidad de las bacterias mesofílicas aerobias en la microbiología de alimentos se ha recomendado para los siguientes objetivos:
• Como indicador de la posiblepresencia de microorganismos patógenos.
• Como indicador del valor comercial de un alimento.
• Como indicador de las condiciones higiénicas en que ha sido manejado el producto.
• Como indicador de la idoneidad de un ingrediente cuando se va a incorporar en alguna formulación.
• Para seguir la eficiencia de un proceso germicida o de preservación.
• Para predecir la vida de anaquel de un alimento.Objetivo.
El alumno comprenderá el método de análisis microbiológico con sanidad e higiene, además de que aprenderá la forma de conteo de CFU en sembrado en superficie.
MATERIAL Y MÉTODOS
MATERIAL REACTIVOS EQUIPO
• Cuchillos
• Pinzas
• Espátulas
• Tijeras
• 6 tubos de ensaye
• 2 frascos con tapón de rosca
• 7 pipetas bacteriológicas estériles de 1 y 10 ml.
• 7 cajas Petri de vidrio.
•Porta pipetas
• Algodón
• Aluminio
• Etiquetas
• Matraz para aforar a 100 ml • Agar para métodos estándar
• Solución buffer diluyente. • Horno para esterilizar
• Incubadora para termostato
• Autoclave
• Baño maría
• Balanza analítica


PREPARACIÓN DE REACTIVOS
a) Suspender 24 gr de medio deshidratado en un litro de agua destilada.
Dado que lo que se utilizó 100ml preparamos unadilución de este volumen.
(24 gr * 100ml) /1000ml = 2.4
b) Solución Stock

KH2PO4.................................................... 34 g
Agua destilada........................................... 1000 ml

Puesto que solo se requería menos de esta solución preparamos 100 ml
(34 gr *100ml) / 1000ml = 3.4gr de KH2PO4

Disolver el fosfato en 500 ml de agua destilada y ajustar el pH a 7.2...