Metabolismo Microbiana

MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

PRACTICA No. 13 METABOLISMO BACTERIANO I. OBJETIVO Conocer el metabolismo de dos bacterias, así como otras actividades bioquímicas, que servirán de criterio para clasificarlas e identificarlas. II. INTRODUCCION Metabolismo es el conjunto de reacciones bioquímicas que efectúa la célula. El Metabolismo comprende: Catabolismo, durante el cual seefectúan reacciones de degradación o desasimilación de sustratos con producción de energía, la cual es utilizada en síntesis de nuevo protoplasma mediante el proceso de Anabolismo. Además, la energía es utilizada por la célula en otras actividades como: Movilidad, transporte activo de moléculas del exterior al interior de la célula, mantenimiento de barreras osmóticas, etc. Todas las reaccionesmetabólicas de las bacterias son enzimáticas. Los Carbohidratos son metabolizados por la ruta anaeróbica de Embden-Meyerhof Parnas o bien por la ruta oxidativa de las pentosas (Warburg Dickens), las cuales conducen a la formación de ácido pirúvico, el cual, bajo ciertas condiciones (presencia o no de oxígeno), puede transformarse en Acetil-coenzima A y pasar al ciclo oxidativo de los ácidos tricarboxílicosde Krebs. Los electrones y protones liberados de todas estas conversiones son transportados por la cadena respiratoria final en los microorganismos aerobios (respiración indirecta citocrómica), y formada por nucleótidos de nicotinamida, de flavinas y citocromos, hasta el oxígeno si las células son puestas en presencia de él. Otros microorganismos no poseen la cadena citocrómica final y no puedenusar el oxígeno libre como aceptor final de electrones y por lo tanto no desarrollarse en presencia de este elemento, pasando su H y electrones a oxígeno combinado a otros elementos. Estos son los llamados microorganismos anaerobios estrictos. Las diferencias en el metabolismo de las especies bacterianas pueden usarse para diferenciar una especie de otra y por lo tanto son recursos usados paraclasificarlas.

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III. EFECTO DEL OXIGENO MOLECULAR SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

MATERIAL Y SUBSTANCIAS − − − − − − − − − − 2 Cultivos puros en caldo nutritivo. 2 Tubos de ensayo conteniendo agar nutritivo. 2 Aplicadores estériles. Gradilla. Baño de agua a temperatura constante (45 °C). Mechero Bunsen. Cerillos ó encendedor. Tripié. Tela deasbesto. Vaso de precipitados de 600 mL.

TECNICA 1. Fundir el agar contenido en los tubos, en baño de agua y mantenerlo a una temperatura de 45 °C. 2. Inocular en condiciones asépticas los tubos con agar fundido y a 45 °C a partir de los cultivos puros (uno para cada tubo de agar), en la siguiente forma: 3. Introducir el aplicador al tubo que contiene el cultivo bacteriano, cuidando que cuandomenos la mitad del aplicador se impregne con el cultivo. 4. Enseguida introducir el aplicador contaminado hasta el fondo en el tubo de agar fundido a 45 °C y moverlo de un lado a otro para distribuir bien las bacterias en el agar. 5. Tapar el tubo y colocarlo en una gradilla para que se solidifique en forma vertical. 6. Incubar a 37 °C por 24 horas. 7. Observar después de este período a qué alturacreció la bacteria sembrada: en la superficie o en el fondo o bien en todo el tubo. (Fig. 13.1) 8. Anotar resultados y sacar conclusiones.

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IV. METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

MATERIAL Y SUBSTANCIAS − 2 Juegos de tubos de fermentación (con campana Durham), conteniendo carbohidratos - glucosa, lactosa, sacarosa, galactosa, rafinosa, manosa,maltosa, etc. - en caldo con rojo de fenol como indicador. (Apéndice A)

TECNICA 1. Inocular asépticamente cada uno de los tubos de cada juego, con el respectivo microorganismo. Rotular adecuadamente los tubos. 2. Incubar a 37 °C por 24-48 horas. 3. Después de este período observar las reacciones que se efectúan en los medios de fermentación.

INTERPRETACION: • • La utilización del...