Metodo de ANTOCIANINAS Totales en Berries
Páginas: 3 (613 palabras)
Publicado: 12 de mayo de 2015
Determinación de Antocianinas Totales en Berries.
Método del pH diferencial.
Justificación y antecedentes del método.
Las antocianinas cambian reversiblemente el color con el pH. Otros compuestosfenólicos como las antocianinas polimerizadas no producen este cambio por lo que se excluyen de la medida. Las muestras son diluidas con buffers acuosos a pH 1,0 y 4,5 y se miden las absorbancias ala longitud de onda máxima del espectro de la solución a pH 1. La otra longitud de onda medida es a 700 nm. El total de antocianinas se calcula usando el peso molecular y la absortividad de laantocianina mayoritaria en la muestra. En el caso de los arándanos son mayoritarias las malvidinas pero en contenido variable y no están disponibles como estándar analítico, por lo que se expresa comoequivalentes a cianidina 3-glucósido (Absortividad de 26900, PM 445g/mol).
Procedimiento.
Extracción:
1) Pesar exactamente 10 g de frutos (congelados o frescos).
2) Agregar 10 ml de metanol acidificado0.1% HCl (Preparar diluyendo 0,1ml de HCl concentrado en 100 ml de metanol)
3) Homogenizar en Politron por 2 minutos, (centrifugar solo en frutillas) y filtrar a vacio.
4) Repetir el procedimiento 4veces.
5) Juntar los extractos, limpiar con metanol acidificado 0.1% el quitasato y llevar a 50ml, con este mismo, en matraz aforado.
Medición:
1) Tomar una alícuota de 1.00 ml y llevar a 10 ml conbuffer pH 1.0. Dejar estabilizar 30 minutos.
2) Determinar longitud de onda de máxima absorción, haciendo un espectro de barrido desde 400 a 600 nm en el espectrofotómetro (Método 2-Spectrum).(Utilizar agua destilada como blanco de referencia).
3) Tomar otra alícuota de 1.00 ml y llevar a 10 ml con buffer pH 4.5. Dejar estabilizar 30 minutos.
4) Medir absorbancia al máximo determinado y a 700 nmpara ambos pH, luego de que hayan transcurrido los 30min. Registrar estos valores en cada muestra para los cálculos.
5) Las absorbancias, a la longitud de máxima absorción y pH 1, deben estar...
Método del pH diferencial.
Justificación y antecedentes del método.
Las antocianinas cambian reversiblemente el color con el pH. Otros compuestosfenólicos como las antocianinas polimerizadas no producen este cambio por lo que se excluyen de la medida. Las muestras son diluidas con buffers acuosos a pH 1,0 y 4,5 y se miden las absorbancias ala longitud de onda máxima del espectro de la solución a pH 1. La otra longitud de onda medida es a 700 nm. El total de antocianinas se calcula usando el peso molecular y la absortividad de laantocianina mayoritaria en la muestra. En el caso de los arándanos son mayoritarias las malvidinas pero en contenido variable y no están disponibles como estándar analítico, por lo que se expresa comoequivalentes a cianidina 3-glucósido (Absortividad de 26900, PM 445g/mol).
Procedimiento.
Extracción:
1) Pesar exactamente 10 g de frutos (congelados o frescos).
2) Agregar 10 ml de metanol acidificado0.1% HCl (Preparar diluyendo 0,1ml de HCl concentrado en 100 ml de metanol)
3) Homogenizar en Politron por 2 minutos, (centrifugar solo en frutillas) y filtrar a vacio.
4) Repetir el procedimiento 4veces.
5) Juntar los extractos, limpiar con metanol acidificado 0.1% el quitasato y llevar a 50ml, con este mismo, en matraz aforado.
Medición:
1) Tomar una alícuota de 1.00 ml y llevar a 10 ml conbuffer pH 1.0. Dejar estabilizar 30 minutos.
2) Determinar longitud de onda de máxima absorción, haciendo un espectro de barrido desde 400 a 600 nm en el espectrofotómetro (Método 2-Spectrum).(Utilizar agua destilada como blanco de referencia).
3) Tomar otra alícuota de 1.00 ml y llevar a 10 ml con buffer pH 4.5. Dejar estabilizar 30 minutos.
4) Medir absorbancia al máximo determinado y a 700 nmpara ambos pH, luego de que hayan transcurrido los 30min. Registrar estos valores en cada muestra para los cálculos.
5) Las absorbancias, a la longitud de máxima absorción y pH 1, deben estar...
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