Metodo de boom

Extracción de Ácidos Nucleicos Método de Boom (Boom et al. 1990)
El uso de sondas de ácidos nucleicos (AN) en la detección de patógenos humanos se ha convertido en una metodología de muchaimportancia. La purificación de AN de especímenes como ser suero, orina, o cultivos bacterianos, sin embargo, han sido muy laboriosos y requieren de mucho tiempo. Además, los muchos pasos involucrados en lapurificación de AN de estos especímenes por los procedimientos clásicos (involucran lisis mediada por detergentes, tratamiento con proteinasa, extracciones con solventes orgánicos y precipitación conetanol) incrementa el riesgo de transmisión de AN de una muestra a otra (contaminación cruzada). Cuando se usa la extremadamente sensible PCR o el sistema de amplificación basado en la transcripciónpara la detección de unas pocas moléculas de AN de un patógeno, la contaminación cruzada puede fácilmente conllevar a resultados falsos positivos.
Es muy bien conocida la unión del DNA a la silica o apartículas de vidrio en presencia de los agentes caotrópicos NaI ó NaClO4, pero no ha sido aplicado hasta el momento para la purificación de AN directamente de especímenes clínicos. Las propiedades deunión a AN de las células fosilizadas de la pared de una alga unicelular (denominada diatomeas) o silica o partículas de vidrio no han sido evaluadas para los agentes caotrópicos tiocianato deguanidinio (GuSCN) o clorhidrato de guanidinio (GuHCl). GuSCN ha sido demostrado como un poderoso agente en la purificación y detección tanto de DNA como de RNA debido a su potencial para lisar célulascombinado con su potencial para inactivar nucleasas. GuHCl ha sido usado también exitosamente en la purificación de AN a partir de células de mamíferos pero parece ser menos efectivo que el GuSCN enrelación a la inhibición de nucleasas.
El método de Boom se basa en la observación que, en presencia de altas concentraciones del agente caotrópico tiocianato de guanidinio, los AN se unirán a las...