METODO DE EXTRACCION DE ADN DOYLE (1990) MODIFICADO

METODO DE EXTRACCION DE ADN DOYLE (1990) MODIFICADO


Stephania Benavides, Marcela Chávez, Laura Erazo, Vanesa Moncayo, Alejandra Narváez, Kelly Sinisterra. Facultad de Ciencias Agrícolas. Programa de Ing. Agroforestal. Universidad de Nariño. San Juan de Pasto, Colombia.
Presentado a: Ph.D Oscar Checa Jurado
Fecha de entrega: 27 de Noviembre de 2012


RESUMEN

Durante la práctica delaboratorio se realizó el Método de Doyle y Doyle (1990) para la extracción de ADN de hojas jóvenes de maíz (Zea mays) el cual constaba de diferentes etapas algunas de ellas: lisis que consiste en romper las estructuras que confinan el citoplasma y liberar al medio su contenido y otra de purificación, que implica la retirada de la solución. Al terminar el laboratorio y pasar la muestra por lasdiferentes etapas se logró observar pequeñas fibras de ADN, luego se esperó hasta el otro día que se sedimentara para observar una mayor cantidad.

Palabras clave: Extracción, ADN, romper, solución, fibras.



ABSTRACT

During the lab was made Doyle Method for extracting DNA from Maize which consisted of some stages: lysis that consists in breaking the structures that confine the cytoplasmand release their contents to the environment and other purification which involves the removal of the solution. Upon completion of the laboratory and the sample passed through the different stages were able to observe small fibers of DNA, and then waited for until the next day to settle, to observe a greater amount.

Keywords: Extraction, DNA, snap, solution, fibers.

INTRODUCCION

El ADNes una molécula presente en todas las células de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo somos, desde el color del pelo hasta las proteínas que tenemos en nuestra sangre, además constituye el material genético de los organismos y es considerado el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados. La aplicación de las diferentes técnicasempleadas en biología molecular para el análisis del genoma, depende en gran medida de la habilidad para extraer el ADN. Para lo cual se utilizan diversos métodos de extracción, dependiendo del tipo de tejido a emplear.
Durante la extracción de ADN primero es necesario romper la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual lamembrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cualesson dejados en la solución acuosa.


OBJETIVOS

• Evaluar el método de extracción de ADN Doyle y Doyle (1990) en Maíz (Zea mays)

• Observar la fibra de ADN obtenida después de aplicar el método de extracción.

• Aplicar conocimientos aprendidos en clase acerca de los protocolos de extracción de ADN.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES

• Micropipetas
• Puntas para micropipetas(azul, amarillas, blancas).
• Solución buffer (previamente preparado).
• 2 Tubos Eppendorf.
• Cloroformo
• Isopropanol
• Acetato de amonio.
• Etanol al 70%.

METODO

1. Macerar en nitrógeno líquido, 0,6 g de tejido fresco.
En el caso del laboratorio no se macero con nitrógeno líquido debido a la falta del reactivo. El punto se podía omitir sin alterar el resultado de la extracción.

2.Se añadió 7ml de buffer de extracción precalentado a 65°c por 10 min a la planta y se macero.
El buffer se calentó a 65°C ya que esta temperatura es considerada como el grado molecular. Este se agregó a las hojas de maíz y se macero.

3. Se incubo el buffer macerado por 20 min a 65°C y cada 5 min se mezcló por inversión.
4.
El líquido resultante del macerado buffer- hojas de maíz, se...