Metodo de glucosa en sangre
Páginas: 4 (955 palabras)
Publicado: 12 de enero de 2012
APARTADO III DETERMINACIONES COLORIMÉTRICAS ESPECÍFICAS DE COMPUESTOS: DETERMINACIÓN DE GLUCOSA (MÉTODO GLUCOSA - OXIDASA). DETERMINACIÓN DE NITRITO (MÉTODO DE LA SULFANILAMIDA:N-NEDA) (EmilioFernández, Aurora Galván, Isaac Túnez)
3(III). PROTOCOLO A REALIZAR 3(III).1. Determinación de glucosa (método glucosa - oxidasa) Está basado en el esquema indicado a continuación. La glucosa oxidasa oxidaa la glucosa originando ácido glucónico y H2O2. El peróxido de hidrógeno liberado reacciona con un cromógeno (fenol/4-aminoantipirina) por la reacción de Trinder, para dar una quinona que absorbeentre 492 y 550 nm. La intensidad de color producida es directamente proporcional a la concentración de glucosa. Glucosa Glucosa-oxidasa Ac. glucónico + H2O2 Quinona + 2H2O
H2O2 + fenol +4-amino-antipirina
Peroxidasa
Puede analizarse por este método cualquier muestra: suero libre de hemólisis, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, un hidrolizado de muestras de hígado para valorar glucógenoetc. 1. Paso primero: Pipetear en tubos marcados como: blanco, estándar y muestras, los reactivos indicados (composición en Anexo). Incluir tantos tubos de muestras como se considere conveniente.Añadir en último lugar el reactivo para comenzar la reacción. Reactivos Estándar (glucosa, 100 mg/dL) Muestra Reactivo Blanco ----2 mL Estándar 20 µL --2 mL Problema --20 µL 2 mL
2. Paso segundo:Incubar, 15 min a 37 ºC ó 30 min a temperatura ambiente. 3. Paso tercero: Ajustar el espectofotómetro a cero de absorbancia (DO) a la longitud de onda de 500 nm y utilizando el tubo blanco, y leer lostubos restantes. 3(III).2. Determinación de nitrito (método de la sulfanilamida:N-NEDA) En medio ácido, el nitrito reacciona con la sulfanilamida para producir una sal de diazonio, la cual reacciona a suvez con el dicloruro de N-naftol-1etilendiamino (N-NEDA), una amina aromática, para dar lugar a un compuesto rosa fucsia de intensidad proporcional a la concentración de nitrito.
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1. Paso...
3(III). PROTOCOLO A REALIZAR 3(III).1. Determinación de glucosa (método glucosa - oxidasa) Está basado en el esquema indicado a continuación. La glucosa oxidasa oxidaa la glucosa originando ácido glucónico y H2O2. El peróxido de hidrógeno liberado reacciona con un cromógeno (fenol/4-aminoantipirina) por la reacción de Trinder, para dar una quinona que absorbeentre 492 y 550 nm. La intensidad de color producida es directamente proporcional a la concentración de glucosa. Glucosa Glucosa-oxidasa Ac. glucónico + H2O2 Quinona + 2H2O
H2O2 + fenol +4-amino-antipirina
Peroxidasa
Puede analizarse por este método cualquier muestra: suero libre de hemólisis, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, un hidrolizado de muestras de hígado para valorar glucógenoetc. 1. Paso primero: Pipetear en tubos marcados como: blanco, estándar y muestras, los reactivos indicados (composición en Anexo). Incluir tantos tubos de muestras como se considere conveniente.Añadir en último lugar el reactivo para comenzar la reacción. Reactivos Estándar (glucosa, 100 mg/dL) Muestra Reactivo Blanco ----2 mL Estándar 20 µL --2 mL Problema --20 µL 2 mL
2. Paso segundo:Incubar, 15 min a 37 ºC ó 30 min a temperatura ambiente. 3. Paso tercero: Ajustar el espectofotómetro a cero de absorbancia (DO) a la longitud de onda de 500 nm y utilizando el tubo blanco, y leer lostubos restantes. 3(III).2. Determinación de nitrito (método de la sulfanilamida:N-NEDA) En medio ácido, el nitrito reacciona con la sulfanilamida para producir una sal de diazonio, la cual reacciona a suvez con el dicloruro de N-naftol-1etilendiamino (N-NEDA), una amina aromática, para dar lugar a un compuesto rosa fucsia de intensidad proporcional a la concentración de nitrito.
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