Metodo De Kunitz

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS



Laboratorio de Métodos de Análisis

Práctica.

“DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS PROTEOLÍTICAS.
MÉTODO DE KUNITZ”Carrera: QBP
Grupo: 5QV2.
Sección: 4
Profesor: Guillermina Rosas Sandoval
Alumna: Reyna Cordero Diana Faith










FUNDAMENTO:
Este método consta de una muestra problema y un testigo, con lafinalidad de descartar la hidrólisis de la caseína por calentamiento. Se basa en la medición en cantidad de péptidos y aminoácidos solubles liberados durante la hidrólisis de la caseína por proteínasproteolíticas (bromelaína y papaína) aprovechando su capacidad de absorción selectiva a longitud de onda de 280 nm.
OBJETIVOS:
El alumno:
a) Elaborará una curva estándar de actividad enzimática.
b)Determinará la actividad proteolítica de la bromelaína, la papaína y otras proteasas.
RESULTADOS:
TABLA 1. ACTIVIDAD ENCIMÁTICA DE LA TRIPSINA.
Tubo
Concentración de Tripsina (mg/mL)
A280 ProblemaA280 Testigo
A280 Corregida
T1 y 1
0.04
0.384
0.165
0.219
T1 y 2
0.08
0.51
0.168
0.342
T1 y 3
0.12
0.621
0.167
0.454
T1 y 4
0.16
0.658
0.179
0.479
T1 y 5
0.2
0.726
0.173
0.553
PROBLEMAS
TI y IBromelaína 1:10
0.799
0.253
0.546
TII y II
Bromelaína 1:20
1.039
0.31
0.769
TIII y III
Papaína 1:2
1.056
0.56
0.506
TIV y IV
Papaína 1:4
0.698
0.388
0.31


TABLA 2. CURVA DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA ESPECÍFICAPARA LA DIGESTIÓN DE CASEÍNA POR TRIPSINA.
Tubo
Unidades Trípticas
A280 Corregida
1
0.004025
0.219
2
0.00805
0.342
3
0.012075
0.454
4
0.0161
0.474
5
0.020125
0.553


DISCUSIONES:

CONCLUSIÓN:BIBLIOGRAFÍA:
[PDF] Las enzimas proteolíticas o proteasas-tesiuami.izt.uam.mx/uam/aspuam/tesis.
Voet, Voet; Bioquímica , 3er edición, Ed. Panamericana ; pág. consultadas : 533, 534 (proteasas)

PREGUNTASEXTRA:
a) Defina actividad enzimática y actividad específica.
Actividad enzimática o concentración de enzima: unidades de enzima por mL de solución. (U/mL).
Actividad específica (U/mg): actividad...