Metodo De Ritchie

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

Fundamento:
El empleo de éter y formaldehido permite liberar las formas parasitarias de las grasas por disolución de las mismas y con el formolse fijan y se conservan.
La concentración se hace por centrifugaciones sucesivas.
Material:
* Tubos de ensaye.
* Vaso de precipitados.
* Embudo.
* Gasas.
* Pipeta Pasteur.
*Pipeta serológica.
* Agitadores (o aplicadores de madera)
* Portaobjetos.
* Cubreobjetos.
* Microscopio.
* Centrifugadora.
Reactivos:
* Solución isotónica de cloruro de sodioNaCl.
* Solución de formaldehido al 10%.
* Éter etílico.
* Yodo lugol.
Biológico:
* Materia fecal.
Técnica:
1. Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente un gramo demateria fecal en el tubo de ensayo, se añaden 5 ml de solución salina y se homogeniza.
2. Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en otro tubo deensayo.
3. Se centrifuga la suspensión a 2500 RPM durante 1 min.
4. Se decanta el sobrenadante y se re-suspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y re-suspendiendo lasveces que sea necesario hasta que el sobrenadante sea claro.
5. Al último sedimento se le agregan 4 ml de solución de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 minutos.
6. Seañaden 2 ml de éter, se tapan los tubos y se agitan energéticamente durante 30 segundos.
7. Se centrifuga durante 2 minutos a 1500 RPM.
8. Después de centrifugar se observaran 4 capas:* Éter en la superficie.
* Un tapón de restos fecales.
* Formaldehido.
* Sedimentos en el fondo del tubo.
9. Se introduce una pipeta Pasteur a través de las capas hasta llegaral fondo, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
10. Se añade una gota de yodo lugol y se coloca un cubreobjetos.
11. Se observa en microscopio a 40X....