metodo kenhlddal

Francisco Santiago. Engineering Department.
INTRODUCCIÓN
El contenido total de proteínas en los alimentos está conformado por una mezcla compleja de proteínas. Estas existen en una combinación con carbohidratos o lípidos, que puede ser física o química. Actualmente todos los métodos para determinar el contenido protéico total de los alimentos son de naturaleza empírica. Un método absoluto esel aislamiento y pesado directo de la proteína pero dicho método se utiliza  sólo a veces en investigaciones bioquímicas debido a que es dificultoso y poco práctico
En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas yotros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores.  El nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio.  La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico.  Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (oH2SO4) estandarizado para determinar  el nitrógeno contenido en la muestra.
El resultado del análisis es una buena aproximación del contenido de proteína cruda del alimento ya que el nitrógeno también proviene de componentes no proteicos.
El método Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones. Originalmente se utilizó permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación (digestión), sin embargo,los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se descartó.  En 1885 Wilforth encontró que se podía acelerar la digestión utilizando ácido sulfúrico y añadiendo un catalizador.  Gunning en 1889 propuso añadir  sulfato de potasio que eleva el punto de ebullición del ácido sulfúrico utilizado en la digestión para disminuir el tiempo de la reacción.
En  la actualidad se utilizaprincipalmente Sulfato de Cobre penta hidratrado CuSO4.5H2Ocomo catalizador.
REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MÉTODO DE KJELDAHL
DIGESTIÓN
catalizadores→
(1) n - C -NH2 + mH2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2
proteína                                calor→
NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN
(2) (NH2)SO4 + 2 NaOH          →          2NH3 + Na2SO4+ 2H2O
(3) NH3 + H3BO3 (ácido bórico)         →         NH4 + H2BO3- (ión borato)
TITULACIÓN
El anión borato (proporcional a la cantidad de nitrógeno) es titulado con HCl (o H2SO4)estandarizado:
(4) H2BO3- + H+             → H3BO3
MATERIAL
J.P SELECTA suministra los equipos necesarios para la realización del procedimiento por el métodoKjeldahl.
-1 bureta electrónica “Digitrate-Pro 50”  resolución 0.01 ml.
Código 0182026

-1 balanza analítica deprecisión “FA-2204B” resolución 0,1mg. 
Código 5830039

-1 Unidad de digestión (Bloc Digest) para 6, 12 y 20 plazas. 
Códigos 4000629, 4000630, 4000631
-1 Unidad Scrubber.
Código 4001611
-1 Bomba de circulación de agua.
Código 4001612

-1 Aparato destilador Kjeldahl (Pro Nitro M, S o A). 
Códigos 4002627, 4002851, 4002430

- Material diverso de laboratorio
REACTIVOS
Reactivospreparados:
Es aconsejable la utilización de reactivos ya preparados, especialmente el HCl (o H2SO4) de valoración. Cualquier error en su preparación puede afectar directamente al resultado de la determinación.
Utilizar los siguientes, o sus equivalentes en otras marcas:
•      Ácido Bórico (en polvo) 99.5%     PANREAC 141015
•      Indicador  mixto 4.8 (ó 5) RV   PANREAC 283303
(Rojo metilo + Verde deBromocresol)
•      Indicador mixto  4.4 RV   PANREAC 282430
(Rojo metilo + Azul de Metileno)
•      HCl 0.1N SV   PANREAC 171023
•      HCl 0.25N SV   PANREAC 182318
•      H2SO4 0.1N SV   PANREAC 181061
•      H2SO4 0.2N SV   PANREAC 182011
•      Sodio Hidróxido 40% RE   PANREAC 171220
(Para determinación de N)
•      Acetanilida 99% (Patrón para validación)   PANREAC 151005...