Metodolog A

Metodología
El ADN de un individuo se extrae y se purifica. El ADN purificado puede ser amplificado usando la técnica molecular Reacción en cadena de la polimerasao PCR (del inglés Polymerase Chain Reaction), luego tratado con enzimas de restricción específicas para producir fragmentos de ADN de diferentes longitudes. Estasenzimas de restricción hacen un proceso de digestión restrictiva en el cual reconocen cortas secuencias específicas en el ADN donde cortan formando fragmentos dedistintas longitudes. Los fragmentos de restricción se separan mediante electroforesis en geles de agarosa a través del cual corren debido a un campo eléctrico y sudisociación obedece a la masa o a la carga eléctrica de las muestras según la técnica utilizada. Esto proporciona un patrón de bandas que es único para un ADN enparticular debido a la diferencia en las secuencias del ADN en los individuos donde los sitios de restricción varían. Las bandas pueden ser transferidas por Southern Blot auna membrana donde se hibridan con una sonda que permite determinar la longitud y la separación de los fragmentos. En este paso las cadenas de ADN tienen que estardesnaturalizadas, es decir, en forma de cadena sencilla para permitir la hibridación con las sondas específicas. Las endonucleasas de restricción en su mayoríacortan el ADN de cadena doble en secuencias específicas y cada enzima reconoce un sitio en particular. Un ejemplo es la EcoRI: corta solamente cuando encuentra lasecuencia 5`…G/AATTC…3` en la doble hélice. Para esta técnica, es importante seleccionar endonucleasas que corten en sitios específicos y no sea en secuencias degeneradas.