Metodologia de la investigacion

INCLUSIONES EN BACTERIAS
INCLUSION: deposito insoluble en el citoplasma donde se reservan diferentes sustancias químicas.
TIPOS DE INCLUSIONES:
Glóbulos de sulfuro que sirven de reserva de energía para bacterias que oxidan el H2S.
Gránulos de volutina o gránulos metacromáticos que son de polifosfato. Acumulan fosfato cuando la síntesis de ácidos nucleicos está impedida.

INCLUSIONES DERESERVA
Poly-ß-hidroxibutirato(PHB) es un material lipídico que actúa como reserva de fuente de carbono y energía.
Glucógeno es un polímero de glucosa que se tiñe rojo con lugol.
Son acúmulos de sustancias orgánicas o inorgánicas, rodeadas o no de una envuelta limitante de naturaleza proteínica, que se originan dentro del citoplasma bajo determinadas condiciones de crecimiento. Constituyenreservas de fuentes de C o N (inclusiones orgánicas) y de P o S (inclusiones inorgánicas).
Inclusiones orgánicas:
inclusiones polisacarídicas
gránulos de poli-ß-hidroxibutírico (o, en general de poli-ß-hidroxialcanoatos)
inclusiones de hidrocarburos
gránulos de cianoficina
Inclusiones inorgánicas:
gránulos de polifosfato
glóbulos de azufre
INCLUSIONES POLISACARÍDICAS
Son acumulacionesde a (1-->4) glucanos, con ramificaciones en a (1--> 6), principalmente almidón o glucógeno (según especies), que se depositan de modo más o menos uniforme por todo el citoplasma cuando determinadas bacterias crecen en medios con limitación de fuente de N, pero donde aún sean abundantes las fuentes de C y energía. En esta situación, se detiene prácticamente la síntesis de proteínas y de ácidosnucleicos, y la mayor parte del C asimilado se convierte rápidamente en estos materiales de reserva. Cuando a estas células las pasamos a un medio rico en N, pero carente de fuente de C, estas inclusiones se usan como fuente interna de C para la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas.
Estas inclusiones actúan, pues, como sistemas de almacenamiento de carbono osmóticamente inertes (la célula puedealbergar grandes cantidades de glucosa que, si estuvieran como moléculas libres dentro del citoplasma, podrían tener efectos osmóticos muy negativos).
Síntesis (ejemplo del glucógeno):
fosfoglucomutasa
Glucosa-6-P --------------------------------> Glucosa-1-P
ADP-glucosa-pirofosforilasa
Glucosa-1-P + ATP ---------------------------------------> ADP-glucosa + PP
glucógeno sintetasaADP-glucosa + {a ,1-->4 glucano aceptor}n -----------------------------------------> {a ,1-->4 glucano}n+1
Sobre este polímero lineal actúa la enzima ramificadora (que introduce enlaces a (1-->6) con glucosa), de modo que se forma el glucógeno maduro.
Degradación:
glucógeno fosforilasa
Glucógeno --------------------------------> n {glucosa-1-P}
Para la total degradación del glucógeno se requierentambién enzimas desramificadoras, capaces de romper los enlaces a (1-->6).
Observación:
Para observarlas se recurre a la tinción con una solución de I2 + IK:
glucógeno: aparece de color pardo-rojizo;
almidón (amilopectina): color azul.
GRÁNULOS DE POLI-ß-HIDROXIBUTÍRICO (PHB) Y DE POLI-HIDROXIALCANOATOS (PHA)
Los gránulos de poli-b-hidroxibutírico son acúmulos del poliéster del ácidoß-hidroxibutírico (= 3-hidroxibutírico), rodeados de una envuelta proteínica, y que al igual que en el caso anterior, se producen en ciertas bacterias como reserva osmóticamente inerte de C en condiciones de hambre de N.
Además de la protección osmótica, estos gránulos suponen la ventaja de neutralizar un metabolito ácido (el grupo carboxilo de cada unidad de ß-hidroxibutírico desaparece como tal, alintervenir en el enlace éster con la siguiente unidad). En las especies de Bacillus constituye la fuente de carbono y energía al inicio de la esporulación. Una función semejante parece implicada a la hora del enquistamiento de Azotobacter.
Una célula puede contener de 8 a 12 de estos gránulos, que miden unos 0.2-0.7 mm de diámetro, y que van provistos de una envuelta proteica de unos 3-4 nm de...