Metodologia De Warbugt

Construcción del manómetro
Para la construcción del manómetro se utilizo el siguiente material:
• 1 tabla de triplay de 80 x 50 cm (para sostener las mangueras del manómetro).
• 1 tabla de triplay de 25 x 50 cm (para colocar el biorreactor y como base del manómetro).
• Manguera de 1.5cm de diametro “ (utilizada para la “U” de manómetro)
• Frasco de plástico de 1.6 L.
• Llave de plástico detres vías.
• Adaptadores de la llave de tres vías
• Llaves de paso para agua (plastico)
• Abrazaderas
• Regla
• Termómetro
• Plasti-acero (para sellar los orificios de la tapa del biorreactor)
• Teflón
Procedimiento para la construcción del manómetro
1. Se consiguen los materiales necesarios mencionados anteriormente.
2. Se arman las tablas de modo que tengan un ángulo de 90°.
3. Seenroscan los adaptadores a la llave de tres vías.
4. Se adaptan las mangueras a cada uno de los adaptadores respectivamente.
5. La manguera de 1.5 cm” que está conectada al adaptador inferior de la llave de tres vías se utiliza para hacer la “U”.
6. Para sostener la manguera en forma de “U” se utilizan abrazaderas.
7. La manguera que está conectada al adaptador superior de la llave de tres víasse utiliza para poner una llave de paso para gas.
8. Se conecta otra manguera del mismo diámetro del otro extremo de la llave de paso para gas que está conectada a la llave de 3 vías, esta manguera va conectada al biorreactor.
9. A la tapa del biorreactor se le hacen 2 orificios, uno para la manguera de 1.5 cm y otro para el termómetro
10. Se adapta el termómetro en su respectivo orificio yse sella con plasti-acero (se deja secar por 1 hora).
11. La manguera que se conecta a la llave de paso para gas, se adapta a su respectivo orificio en la tapa del biorreactor y se sella con plasti-acero (se deja secar 1 hora).
12. Asegurarse que no tenga fugas de gas, en caso de que existan fugas erradicar el problema sellando con plasti-acero.
Curva de calibración de biomasa por el métodogravimétrico y espectrofotométrico
Material:
 Capsulas de porcelana
 1 pipeta de 10ml.
 3 pipetas de 1ml.
 Espectrofotómetro
 Celdas para el espectrómetro
 Espátulas
 Balanza analítica
 5 vasos de presipitado
 1 matraz elermayer de 500ml.
 1 micropipeta 100- 1000Ul
 Puntas para micropipetas
 15 tubos de ensaye
 Gradilla
 2 vidrios de reloj
 Agua destilada
 Peptona
Levadura

Procedimiento:
1.- Obtener el peso constante de las cápsulas de porcelana.
2.- En un matraz Erlenmeyer de 500 ml se agrega 250 ml de agua destilada con ayuda de una probeta de 100 ml. Agitar por 5 minutos.
3.- En un vidrio de reloj y con una espátula, pesar 1g de Peptona caseína en la balanza analítica o digital, y se agrega al matraz Erlenmeyer de 500 ml, que contiene aguadestilada.
4.- Se pesa en la balanza digital o analítica con la ayuda de un vidrio de reloj y una espátula 3 g de levadura (Saccharomyces cerevisiae) y se agrega al matraz que contiene agua destilada y peptona. Obteniendo una Solución Madre o Stock con una concentración de 6 g/L. Agitar suavemente y dejar reposar por 10 minutos.
5.- Realizar en los vasos de pp, 5 disoluciones con un rango deconcentraciones de 1 g/L a 5g/L a partir de la solución Stock (utiliza la formula V1C1=V2C2.

Ejemplo de la tabla de datos:
DILUCIONES PARA CURVA DE CALIBRACIÓN DE BIOMASA.
DILUCIÓN
(g/L)
SOLUCIÓN STOCK ml.
AGUA DESTILADA ml. TOTAL ml.


1
1.0
8.33
41.67
50

2
2.0
16.67
33.33
35.33

3
3.0
25.0
25.0
28

4 4.0 33.33 16.67 20.67

5 5.0 41.67 8.33 13.33



MétodoGravimétrico:
1.- De cada dilución preparada a partir de la Stock, vaciar (agitar antes) 20 ml a 2 cápsulas identificadas de numeración correspondiente (no olvides usar las pinzas).
2.- Ya que se tengan todas las cápsulas con las muestras de la dilución, meterlas al horno a 105±5 °C hasta que se logre la evaporación completamente.
3.- Sacar las cápsulas y dejarlas en el desecador por 20 min....