Metodologia Del Reconocimiento De Proteinas

Universidad Santo Tomás
Laboratorio de Bioquímica

Reconocimiento y cuantificación de las proteínas

Nombre: Carrera:Sección:Profesor practico: | Valeska CaviedesFelipe GonzalesGuillermo peñaAgronomía1.1Felipe arenas |
Profesor ayudante: | Álvaro Matamala |

Introducción
Las proteínas son las macromoléculas más importantes en las células y los organismos, componen desde estructurascelulares como enzimas, ribosomas, proteínas de membranas, entre otras a nivel celular hasta ser utilizadas como reservas energéticas, hormonas, anticuerpos, por solo mencionar algunas.
Las proteínas son constituidas por aminoácidos, los cuales se definen como una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxílico (-COOH), que se unen entre sí estos por enlaces peptídicos, cuyaformación conlleva a la eliminación de una molécula de agua al unirse un extremo carboxílico a uno amino, siendo considerado también como una reacción de condensación. Una forma de identificar 4 enlaces peptídicos como mínimo en una proteína es a través del reactivo de Biuret, el cual contiene un sulfato cúprico (CuSO4) que reacciona con los enlaces en un medio alcalino y se detecta a través deun cambio de color provocado por el Cu2+(1) .
Los enlaces peptídicos pueden sufrir modificaciones por condiciones ambientales como temperatura, pH, presión o agentes desnaturalizantes, lo que provoca que las proteínas formadas sean modificadas y desnaturalizadas, es decir, pierdan su estructura tridimensional normal o común y paralelamente su función de forma irreversible o reversibledependiendo de la proteína.
Otra forma de detectar proteínas y cuantificar su número presencial en una muestra es con métodos de Colorimetría, la cual se basa en la obtención de cifras mediante tonalidades. Esto es logrado por la absorción de longitudes de ondas de la luz blanca (espectro visible), que es proporcional al espesor del medio y la concentración de sustancia, lo cual el objeto refleja otransmite una longitud de onda específica y la otra energía es liberada por calor (2).

De esto último se puede deducir que la absorbancia (intensidad) de la luz por una sustancia disuelta en medio transparente será proporciona l a su concentración molar basándose en la ley de Lambert – beer la cual es expresada en la siguiente ecuación: log I0/I = E c I o DO = E C I, que será utilizada eneste práctico.

Objetivos
* Conocer los métodos de reconocimiento y cuantificación de las proteínas y sus fundamentos teóricos

Materiales y métodos
* Reactivo de Biuret
* Solución NaCl 0.9 % p/v
* Plasma diluido 1 : 20 v/v con NaCl 0.9 % p/v
* Solución estándar de seroalbúmina de Bovino (SAB) 5 mg/mL en NaCl 0.9 % p/v
* Espectrofotómetro UV- Visible modelo:SP-2000UV, marca: spectrum
* Cubetas de cuarzo y de vidrio
* Tubos de ensayo de 10 mL y gradillas
* Matraces Erlermeyer de 100 mL
* Pipetas de 1, 5 y 10 mL
* Baño de agua a 50°C modelo: mb-301 marca: n-biotev
* Balanza analítica

Procedimiento:

-Reconocimiento por absorbancia a 280 nm de luz ultravioleta (UV).
1. Se lleno 3 tubos de ensayo con diferentessoluciones, el primero con 3 ml de NaCl 0.9 % p/v, el segundo con 3 ml de SAB 2,5 mg/ml y el tercer tubo con 3 ml de plasma diluido
2. Se introdujo la solución de NaCl a una cubeta de cuarzo para fuese de referente como muestra blanco
3. La cubeta con la solución de NaCl 0.9 % p/v se midió primero en el espectrómetro, luego se calibro y se midió en una frecuencia de 280 nm
4. Seintrodujo la solución de SAB al espectrómetro para obtener su absorbancia
5. Se introdujo la solución de plasma diluido al espectrómetro para obtener su absorbancia
6. Se obtuvo la relación de concentración del plasma diluido con su absorbancia y la concentración y absorbancia del SAB
7. Se dividió por 80 la concentración del plasma diluido y luego por 10 para la conversión de unidad...