metodologia para modificacion genetica

La metodología para la modificación genética hereditaria
La metodología para la modificación genética en los embriones, será aplicada primero en animales mamíferos, ya que este método es muydifícil sin embargo como no se busca modificar el genoma humano y para tener más seguridad se experimentara con animales mamíferos.
Fertilización in vitro con la nueva metodología
Para llevar a cabo lanueva propuesta metodológica para fertilizar los ovocitos bovinos se utilizaron cajas de cultivo de cuatro pozos. En cada pozo se introdujo otro pozo (de vidrio) más pequeño: 3 mm de alto x 8 mm dediámetro (1/3 de la altura y la mitad del diámetro del pozo original). El procedimiento consistió en llenar con medio de fertilización suplementado con 0.6% de BSA (libre de ácidos grasos), 0.2 mM de ácidopirúvico, 100 IU/ml de penicilina y 50 μg/ml de estreptomicina los pozos interno y externo del plato doble fondo hasta que el pozo interno quede cubierto de medio, las cajas se dejaron preincubando encondiciones de cultivo a 38.5 °C/5% de CO2/humedad relativa del 99%/ h (mínimo). Luego se depositaron los CCOs previamente madurados, que igualmente fueron lavados tres veces con medio TL-Hepessuplementado con 0.3% de BSA y 0.2 mM de ácido pirúvico; y además, se adicionaron heparina (concentración final 2 μg/ml) y PHE (2 mM de Penicilamina, 1 mM de Hipotaurina y 250 mM de Epinefrina).Posteriormente, se depositaron en el fondo del pozo externo 30 µl del semen previamente descongelado en baño maría a 35°C/1 min y se dejó por un tiempo de 1 hora en condiciones de cultivo para luego retirar elmedio externo y dejar sólo la copa interna la cual contiene los CCOs y espermatozoides con una alta movilidad a una concentración final de 1 x 106 espermatozoides/ml por un periodo de 18 horas. Instrumentos para la metodología
4 Cajas de cultivo de cuatro pozos
4 Cajas de pozo de 3 mm de alto x 8 mm de diámetro
Pipeta
Cantidades de las sustancias a utilizar en la metodología
0.6% de BSA...