Metodos cromatograficos

MÉTODOS
CROMATOGRÁFICOS:
1. Exclusión molecular
2. Intercambio iónico
3. Afinidad
SSN

Propiedades de una proteína que son útiles
para su purificación por cromatografía
Peso molecular
Carga iónica
 Hidrofobicidad
 Unión específica a
ligantes


Pasos para purificar a una proteína
por cromatografía en columna:

EXCLUSIÓN MOLECULAR O
FILTRACIÓN EN GEL
FUNDAMENTO TEÓRICO La cromatografía de exclusión o filtración en gel es una
clase de cromatografía sólido-líquido que permite la
separación de moléculas en función de su TAMAÑO.
 En este tipo de cromatografía lafase estacionaria es un
gel. El gel está constituido por partículas esféricas que
tienen POROS de un determinado tamaño.

CROMATOGRAFÍA DE
FILTRACIÓN EN GEL
 Las moléculas de tamaño
pequeñodifunden a través
de los poros de las
partículas del gel y por
ello son retardadas en su
paso por la columna.
 Las moléculas grandes
no entran en los poros de
las partículas del gel,
eluyenprimero.

Soportes que pueden ser de material variado como:
Inorgánicos

Polímeros sintéticos

Polisacáridos

•Sílica Porosa

Poliacrilamida (Biogel P)

•Vidrio de Poro
controladoCelulosa (Cellulafine,
Sephacel)

Polimetacrilato (Spheron)

Poliestireno

•Hidroxiapatita

Dextrano (Sephadex)
Agarosa (Sepharosa,
Superosa, Ultragel A y
BioGel)

Compuestos Polímeroorgánico – polisacárido
•Poli N,N’ .- bisacrialmida- dentrano (Sephacryl)
•Agarosa – dextrano (Superdex)
•Agarosa – poliacrilamida (Ultradex A A)

DESALADO

Cromatografía Filtración en gelCromatograma de monitoreo de la
eficiencia de la purificación
Abs 280 nm

Aplicaciones de la filtración en gel
 separación de sustancias de distintos pesos
moleculares
 determinación de pesosmoleculares de
proteínas
 Desalar proteínas

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO
IÓNICO
 Separación que se basa en la carga eléctrica de las
proteínas.

 Se aplica en una matriz de carga opuesta...