Metodos De Coloracion Bacteriana

PRACTICA N° 4
METODOS DE COLORACION BACTERIANA
PRACTICA N° 4
METODOS DE COLORACION BACTERIANA

INTRODUCCION
En general, las bacterias y otros microrganismos son transparentes, lo que dificulta su estudio cuando los exámenes se realizan en fresco. Por esta razón, cuando se quieren conocer los detalles morfológicoses necesario recurrir a tinciones .La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por algún componente celular. Existen varios tipos de colorantes, pero los más usados en microbiología son:
a) Sales colorantes:

Los colorantes más comúnmente usados son sales que pueden ser de tipo ácido o básico, términos que no indican necesariamente su pH ensolución, sino que una parte significativa de la molécula sea aniónica o catiónica. Los colorantes básicos consisten en un catión coloreado unido a un anión incoloro (ej,clorhidrato (-) de azul de metileno (+).Los colorantes ácidos tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado (eosinato (-) de Na(+).Los colorantes se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no hamuerto, el proceso de tinción la mata. La célula bacteriana posee constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos, y ellos son los más usados en citología bacteriana. Las bacterias son ricas en ácidos nucleicos que poseen cargas negativas en forma de grupos fosfatos. Los colorantes básicos tiñen la célula bacteriana uniformemente, a menos queantes sea destruido el ARN del citoplasma. Los colorantes ácidos no tiñen la célula bacteriana, y por lo tanto, pueden usarse para impartir al fondo un color de contraste (coloración negativa).Desde el punto de vista práctico entonces, los colorantes básicos tiñen estructuras de naturaleza ácida, como la cromatina nuclear de las células eucariotas y procariotas; los colorantes ácidos reaccionancon sustancias básicas, como las estructuras citoplasmáticas de las células eucariotas.

b) Colorantes liposolubles:

Los colorantes liposolubles se combinan con los componentes lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de los depósitos de grasa. Ej. negro Sudán. En algunos casos se usan mordientes con la finalidad de engrosar estructuras muy finas, con elpropósito de hacerlas visibles al microscopio óptico; uno de ellos es el ácido tánico que se emplea en la coloración de flagelos y espiroquetas.

1.2 OBJETIVO GENERAL
* Distinguir y diferenciar a las bacterias mediante métodos de coloración.
1.3 OBJETIVOS ESPECIFICOS
* Utilizar el método simple para la coloración bacteriana
* Realizar la coloración Gram y Zielhl Neelsen como método decoloraciones compuestas.
1.4 RECOMENDACIONES GENERALES PARA CUALQUIER COLORACION
* Extendido o frotis.- la lámina debe estar transparente, desengrasada y limpia. Si el cultivo es líquido, con la asa de siembra esterilizada previamente, tomar 1 o 2 gotas y extender suavemente sobre la lámina por objetivo. Si el cultivo es sodio, primero colocar con el inoculo emulsionado y extender suavementesobre la lámina por objeto.
* Fijación: someter a la llama del mechero con calentamiento moderado o con alcohol de 70%, Metanol u otro líquido fijador, según la técnica
* Coloración: cubrir el extendido fijado. Evita evaporación por el tiempo que debe actuar. Se intensifica la coloración por los mordientes como el lugol en el caso de la tinción Gram, acido tánico para teñir flagelos, etc. Eltiempo varía de acuerdo a la técnica
* Diferenciación: con el alcohol simplemente, alcohol acetona, alcohol acido como agentes decolorantes el empleo depende de la técnica, para desprender el colorante.
* Lavado: con agua corriente para sacar el exceso del diferenciador, en algunos casos se recomienda utilizar agua destilada.
* Recolocación: para tinción de estructuras que se...