Metodos De Determinacion De Hormonas

Facultad de Estudios Superiores de Cuautitlán
LABORATORIO DE ANÁLISIS BIOQUÍMICOS CLÍNICOS II
Métodos de Determinación de Hormonas: ELISA, RIA e IRMA
ORTIZ ARBALLO MARÍA GEORGINA

PACHECOMORALES IRMA CAROLINA
SANDIN MERCADO PAOLA

TÉCNICA DE ELISA

TÉCNICA DE ELISA
Se basa en la detección antígeno (Ag) o anticuerpo (Ac), inmovilizado sobre una fase sólida y mediante anticuerpos quedirecta o indirectamente producen una reacción.
La prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó anticuerpos marcados con una enzima cuyo producto colorido, puede ser medidoespectrofotométricamente.

VENTAJAS
Muy sensible  Gran número de muestras procesadas simultáneamente.  Resultados rápidos  Utilización de reactivos menos tóxicos  Menor costo  Cuantificación de sustanciasdiversas:


 


 

Hormonas Fármacos Citoquinas Metabolitos Mediadores de inflamación Agentes infecciosos

COMPONENTES DE ELISA
Soporte Sólido (Latex, poliestireno, polivilino)  Antígenoo Anticuerpo  Conjugado enzimático y cromogénico Anticuerpo/Antígeno + enzima(ALP)  Sustrato + cromógeno (p-Nitrofenil Fosfato)


Ag o Ac fijado a una fase sólida

Ag o Ac en la muestraConjugado: Ac+Enizma

Sustrato + cromógeno

Cambio de color

FASES DEL ELISA
1. Titulación de la cantidad de Ag o Ac a utilizar para sensibilizar la placa. 2. Sensibilización

3. Lavado
4.Bloqueo

5. Lavado
6. Incubación de las placas con las muestras y controles positivos y negativos 7. Lavado 8. Incubación del conjugado 9. Lavado 10.Incubación del sustrato

11.Detenimiento de lareacción enzimática
12.Lectura de las placas

TIPOS DE ELISA


Competitivos:




No- Competitivos:
• •

ELISA Competitivo

•

ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA Tipo Sandwich: Doble  Heterólogo

ELISA INDIRECTO

Lavado

Lavado

Ag fijado al pozo

Adición de la muestra con Ac

Formación del inmunocomplejo

Adición del complejo

El sustrato (H2O2), otorga...