Metodos De Extraccion De Nematods

1.1 Extracción del nemátodo entomopatógeno Heterorhabditis sp. reproducidos en chinche hedionda, Scaptocoris talpa Champ. y gallina ciega, Phyllophaga sp.de las pruebas realizadas para la revigorización en el Laboratorio Nematológico del Ingenio Pantaleón.

1.2.1 Importancia:
Según Leucona, E (1997) los nemátodos en estado juvenil L3, al momento de reproducirse dentro de suhospedero, abandona el cadáver en busca de una nueva presa. Es por esta razón que se le facilita al nemátodo la salida del medio saprófito en el que se encuentra, mediante la aplicación de humedad, utilizando diferentes metodologías de extracción y captura de nemátodos en estado L3.
Después de la captura de estos nemátodos que han abandonado el cuerpo necrosado de chinche hedionda, S. talpa Champ. ygallina ciega, Phyllophaga sp., estos serán utilizados para inoculación, ya sea en el hospedero definitivo o en el huésped “trampa” que en este caso es la larva de Galleria mellonella L.

1.2.2 Objetivos:
* Extraer los nemátodos que se obtuvieron de las actividades de revigorización.
* Obtener nemátodo para su posterior inoculación en huéspedes, y con ello proseguir con lasactividades de revigorización.
* Identificar el método de extracción en el cual el nemátodo extraído posee mejores características de inoculación en Galleria mellonella L., en el Laboratorio Nematológico.

1.2.3 Metodología:
Para la extracción de nemátodos durante la revigorización, se utilizaron diversas metodologías:

Metodología 1:
Embudo de Baermann:
Como en toda operaciónrealizada dentro del laboratorio, el primer paso es la desinfección del lugar de trabajo y de los materiales a utilizar con alcohol etílico al 95%. Luego de ello se prepararon los insectos parasitados que se colocaron en el embudo.
El embudo se colocó sobre el soporte de madera, se le colocó la manguera de huleal final del embudo a manera que quede bien ajustada, se colocó una pinza para cerrar lasalida de agua. Se le agregó agua al embudo y se coloca la malla de metal, sobre ella se colocaron también las toallas de papel kimwapes, tipo “Kleenex®”.
Sobre la toalla húmeda se colocaron los insectos parasitados para que los nemátodos empiecen a salir y empiecen a decantar al fondo del embudo, Con ayuda de una piceta se aforó el embudo dirigiendo el agua hacia las paredes del embudo.El nivel delagua debe estar ligeramente por encima de la malla, lo suficiente para mantener humedecidos los insectos. Se repuso el agua evaporada conforme se fue necesitando. Después de 48hrs se colectaron 50 ml, purgando el embudo. Al nemátodo colectado se le desinfecta con cloro al 0.01% y se le realizó conteo, luego se inoculo en larvas de Galleria mellonella L.

Metodología 2:
Trampa de White:
Sedesinfectó con alcohol etílico al 95% los materiales y el lugar de trabajo. Luego de ello, se procedió a forrar con papel manila las cajas Petri. Dichas cajas Petri ya forradas se colocaron en la bandeja de manera que la base quede hacia arriba, para colocar allí las larvas parasitadas. Se humedeció con agua la caja Petri y se colocaron las larvas en la orilla de la caja. Se agregaron 100ml de agua ala bandeja y se tapó con una bolsa de plástico. Se etiquetó con la fecha. Se dejó por 24 horas y se desmontó, luego se desinfectó el nemátodo encontrado con cloro al 0.01% y se le realizó conteo.
Al desmontar se le agregaron 100ml más de agua y se dejó reposar por otras 24hrs. Se le realizó desinfección y conteo a los nemátodos extraídos.
Metodología 3:
Bandeja de Whitehead:
Se desinfectaronlos materiales a utilizar con alcohol al 95%. El tamiz se colocó sobre una bandeja y en él se colocaron las larvas del desmonte del día, el cual fue inoculado con nemátodo revigorizado. Con la piceta se humedecieron las larvas y luego se le agregaron 500ml de agua esterilizada. Se cubre con una bolsa de plástico, y se dejó reposar por 24hrs. Se retiró el agua y se colocó en un beaker y se...