Metodos de laboratorio clinicos para la deteccion de Ag

METODOS DE LABORATORIO CLINICO PARA LA DETECCION DE Ag- Ac
Los métodos inmunológicos o inmunoensayos son métodos analíticos basado en la reacción Antígeno- Anticuerpo (Ag-Ac). Se entiende como antígeno (Ag) cualquier molécula que puede ser reconocida específicamente por cualquiera de los componentes sistema inmunitario (SI) que protege al organismo de una amplia variedad de agentesinfecciosos. En un sentido más restrictivo un Ag es cualquier molécula capaz de inducir la producción de anticuerpos (Ac) específicos. Los anticuerpos (Ac), también conocidos como inmunoglobulinas, son un grupo de moléculas séricas que producen los linfocitos B. Los diferentes tipos de Ac tienen una estructura básica común a todos ellos, siendo específico de cada uno el sitio por el que se unen al Ag. Lazona de la molécula del Ag a la que se une el Ac se denomina epítopo. Un antígeno puede presentar un número variable de epítopos de estructura única o repetitiva. La complejidad estructural de las proteínas favorece que éstas presenten por lo general un número elevado de epítopos. Los reactivos para anticuerpo se desarrollan a partir de anticuerpos policlonales y monoclonales.

Aunque elprincipio es el mismo, existen muchas modalidades de métodos que difieren, sobre todo, en la formar de visualización de los complejos Ag-AC. Cuando lo que se mide es directamente el precipitado formado por los complejos formados, se habla de reacciones de precipitación y si lo que se mide es la aglutinación de células, reacciones de aglutinación. Sin embargo estos procedimientos requieren grandescantidades de Ag o de Ac para su visualización. Por ello actualmente se acude a métodos que permiten visualizar esos complejos mediante mecanismos indirectos, que son capaces de emitir alguna señal. Entre ellos destacan, elinmunoenzimoensayo, que utilizan sustancias que de cambian de color y el Inmunofluorescencia, por su propiedad de emitir fluorescencia, quimioluminiscencia, cuando se hacen visible porla emisión de luz o radioinmunoensayo cuando se hacen patentes por la emisión de radioactividad.
A veces se trata de técnicas que utilizan una combinación de varios procedimientos, como es el caso del Western Blott (inmunoblotting) o la inmunocitometría de flujo,entre otros. Esto hace que estos métodos de inmnunoanálisis, tengan muchas aplicaciones dependiendo de si lo que se quiere medir sonsustancias solubles o fijadas a células o a tejidos, etc.(Tabla 1).
Técnicas de inmunoprecipitación
En estas técnicas las sustancias (antígenas) son analizadas midiendo el precipitado visible de Ac-Ag. Su realización requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitación del complejo Ag-Ac. Existen diferentes modalidades, como son laprecipitación en tubo, difusión radial de Ouchterlony, inmunoelectroforesis y difusión radial de Mancini.
Técnica de precipitación en microtubos. El complejo Ag-Ac precipita espontáneamente o por centrifugación cuando la proporción ente Ags y Acs de la mezcla es equivalente. Si a diferentes cantidades de antígenos se le añade igual cantidad de un antisuero, la precipitación es máxima allí donde la proporciónentre ambos es óptima (parte central de la curva). Sin embargo disminuye en donde predomine el Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva respectivamente). Este tipo de reacción es utilizado sólo en contados casos debido a que requiere grandes concentraciones de antígeno o de anticuerpo para poder medir el precipitado formado (Figura 1).
Técnica de difusión radial doble de Ouchterlony. Serealiza en placas de agar en donde se practican pocillos En uno de estos pozos se coloca el suero o muestras a investigar y en el resto se coloca el anticuerpo, preparado frente a la sustancia que se quiere identificar. Cuando difunden, ambos sistemas se encontrarán y se formará en la zona de equivalencia el complejo Ag-Ac, que se hace visible en forma de una línea de precipitación si hay un solo...