Metodos En Biologia Celular

Métodos en Biol. Celular:
- Separación de células en cultivo; - Fraccionamiento celular; - Aislamiento y caracterización de macromoléculas celulares.

Dra. van Zundert

Capitulo 8
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4

Capitulo 5 + 6
www.whfreeman.com/lodish

Tipos Experimentos
“In vivo” (“en el organismo viviente”): Experimentos que se llevan a cabo en organismoscompletos.

“In vitro” (“en vidrio”): Experimentos que se realizan sobre cultivos celulares, Células primarias Líneas célulares Hibridomas Células madres

Figure 8-4 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

¿Como estudiar un tipo célula?

Neurotransmisión: glutamato excitatorio - Neuronas - Glia - Fibroblastos inhibitorio dopamina acetilcolina

1. Las células deben ser“extraídas”

Disección 1. Mecánico Manual Láser

microdisección de captura por láser

1. Las células deben ser “extraídas” y separados

Disección 1. Mecánico 2. Enzimático Enzimas proteolícas - Tripsina - Colagenasa Degradan de matriz extracelular

Figure 8-3 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

2. Separación de los distintos tipos de células
Se pueden utilizarvarios métodos para separar los diferentes tipos celulares de la suspensión celular, según sus propiedades: 1. La diferencia de tamaño de las células permite separarlas por centrifugación. 2. La capacidad que tienen algunos tipos celulares de adherirse al vidrio o al plástico, permite separarlos de otras células que se adhieren débilmente. 3. Algunos anticuerpos se unen específicamente a sustanciaspresentes en determinadas células. Luego, se emplea diferentes matrices (como colágeno, bolitas de polisacáridos, plástico) a la cuales sólo las células reconocidas por los anticuerpos podrán adherirse. 4. Se emplean anticuerpos acoplados a colorantes fluorescentes para marcar células específicas adheridas a ellos. Las células marcadas por interacción con el anticuerpo pueden ser separadas de las nomarcadas en un separador de células activado por fluorescencia o cell sorter ( ver figura).

Citofluorímetros de flujo: “Sorter” de Células

no-fluorescente

Equipo para la separación de células activado por fluorescencia. Las células individuales viajan a través de un conducto muy delgado y son iluminadas por un láser. El equipo puede detectar qué células emiten fluorescencia (por elanticuerpo adherido). Cada célula es incorporada en una gota que es “cargada” eléctricamente como negativa o positiva en función de la presencia o ausencia del colorante fluorescente. Luego, las gotas son separadas por un campo eléctrico hacia los recipientes colectores según su carga
Figure 8-2 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

Tipos Experimentos
“In vivo” (“en el organismoviviente”): Experimentos que se llevan a cabo en organismos completos.

“In vitro” (“en vidrio”): Experimentos que se realizan sobre cultivos celulares, Células primarias Líneas célulares Hibridomas Células madres

Líneas célulares

Table 8-1 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

Líneas célulares: HeLA
Las células HeLa constituyen una línea de células epiteliareshumanas procedentes de un carcinoma cervical, y las primeras células humanas de las cuales se estableció una línea celular permanente. En 1951 se practicó una operación quirúrgica a la paciente Henrietta Lacks (de ahí el nombre), una mujer afroamericana de 31 años, en la cual se extrajeron células de un carcinoma en el útero con la intención de evaluar su malignidad. La paciente falleció 8 mesesdespués a causa de su tumor. Las células extraídas estaban invadidas por el virus del papiloma humano 18 (HPV18), transformándose en células tumorales.

Hoescht - Replicación indefinidamente: immortal - Hasta hoy >60.000 publicaciones con HeLa -10-20% otras líneas célulares estan contaminados con HeLA

Tipos Experimentos
“In vivo” (“en el organismo viviente”): Experimentos que se llevan a...