Metodos Espectrofotometricos

EL método Biuret utilizado para la cuantificación e identificación de proteínas, es un método un ensayo calorimétrico de un paso donde se cuantifica la formación de un complejo estable entreproteínas y cobre (II). El complejo presenta un color violeta característico, que se puede observar a 310nm o 540-560nm, el cual se da por la coordinación de un átomo de cobre con cuatro átomos de nitrógeno.El complejo se basa en la desprotonación de los grupos amida para formar el enlace con el cobre (II) o por el establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libresde los átomos de oxígeno y de nitrógeno del péptido.

Este método presenta baja sensibilidad, pero se puede utilizar un número grande muestras. En el desarrollo de la práctica pudimos notar que elensayo biuret es un método colorimétrico y para dicho caso se necesita la construcción de una curva patrón.


En determinaciones colorimétricas, se cumple una relación proporcional entre la magnitudo intensidad de color que da una reacción, y la cantidad del reactivo que lo provoca. Esta intensidad se mide con el espectrofotómetro o colorímetro en función de las concentraciones crecientes delas sustancias se obtiene una recta, es decir, a mayor cantidad de proteína, mayor cantidad de producto de reacción, y por lo tanto mayor color.


Método de Biuret
El nombre de la reacción procededel compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de urea con
Eliminación de amoníaco.


Si una solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico (CuSO4) se añade a una soluciónde proteína se forma una complejo entre
el ion cúprico y los enlaces peptídicos, con aparición de una coloración violeta-púrpura, que presenta un máximo de absorción a
540 nm.


Lascaracterísticas más importantes de la reacción son:
• La reacción del Biuret se aplica, a partir de los tetrapéptidos, a todos los péptidos y proteínas.
• Su rango de determinación es de 1 a 6 mg/ml.
• No...