metodos instrumentales

 El presente experimento se ha realizado con el fin de obtener un clonado de un fragmento del gen P44MAPK humano a partir de DNA genómico y RNA que posteriormente se introducirá enbacterias con el fin de obtener plásmidos recombinantes y así realizar un mapa de restricción a partir de la digestión de uno de ellos.
MATERIAL Y MÉTODOS
El material necesario para empezar elexperimento es un sedimento de un cultivo de células de la línea SH-SY5Y derivada de neuroblastoma humano y RNA.
Para ello, inicialmente realizamos una extracción del DNA genómico (gDNA) delas células nombradas, para lo que necesitamos un kit comercial QIAamp DNA Mini de QIAGEN. De esta manera, obtenemos una de las moléculas que queremos clonar.
Es necesario realizar unareacción de retrotrascripción para obtener el cDNA (DNA complementario) a partir de un RNA molde ya que éste no puede ser clonado directamente. Consiguiendo así, su secuencia complementaria mediante unatranscriptasa inversa.
Una vez obtenido las moléculas para clonar, se realiza cuatro reacciones de PCR, concretamente, del cDNA, gDNA, una dilución del gDNA y un control negativo a travésdel cual podemos observar si la muestra está contaminada. Esto permite amplificar el DNA, es decir, aumentar el número de copias a partir de unos cebadores pues gracias a ellos la enzima polimerasapuede actuar, siendo necesario, también, una colección completa de todos los nucleótidos a lo que denominamos hexámeros que la enzima va incorporando de forma aleatoria de seis en seis.
Asípues, llevamos a cabo un análisis de los productos de la PCR mediante electroforesis en geles de agarosa para estimar el tamaño del DNA (Figura.1). Se trata de la técnica analítica más utilizada paratrabajar con ácidos nucleicos. En la formación del gel de agarosa, previamente se ha añadido bromuro de etidio, un agente de tinción que se intercala entre los pares de bases nitrogenadas que frente a...