Metodos

Material y métodos
Muestras
Los pulmones de 100 cerdos clínicamente sanos fueron obtenidos de un rastro de la periferia de la ciudad de mexico. El material fue recolectado en diferentes visitas al rastro, los animales provenían de diferentes granjas localizadas en diferentes estados del país(queterato, Jalisco, estado de mexico, y sonora). La presencia o ausencia de lesiones neumónicas fueel criterio para recolectar las muestras. Se seleccionaron 50 pulmones con lesiones neumónicas, asi como 50 lesiones aparentes. Las lesiones que caracterizaron al grupo con lesiones neumónicas en el presente estudio incluyeron congestion, hemorragia, edema, pleuritis, abscesos y areas de consolidación. Las muestras fueron obtenidas sin considerar las extensión y localización de las mismas conuna limitante.

Aislamiento bacteriano
Se tomo una muestra de tejido normal o con lesiones neumónicas. Las muestras fueron inoculadas en agar sangre con una estria de staphylococcus aureus para proveer el factor V. las placas fueron incumbadas durante 24h a 37ºc bajo condiciones de microaerobiosis. Las colonias sospechosas fueron transferidas a cajas con agar tripticasa soya (TSA)suplementado con 10uq/ml de NAD* y 1% de suero fetal bovino que posteriormente fueron incubadas durante 24h a 37ºc bajo condiciones de microaerobiosis. La condición final de las colonias sospechosas a A. pleuropneumoniae fue obtenida mediante el uso de pruebas bacteriológicas de rutina como tinción de gran, oxidasa, catalasa, ureasa de christensen, reacciona la prueba de camp, satelitismo en presenciade la sepa nodriza de S. aureus independencia de factores de crecimiento utilizando discos impregnados con factor x,v o x+v **13


Histopatología

Las muestras de pulmon para histopatología fueron fijadas en formalina amortiguada (ph 7.2) al 10% y procesadas con la técnica de inclusión en parafina. Se cortaron secciones de 5um y se tiñeron con hematoxilina y eosina (HE). Las lesionesmicroscópicas fueron examinadas por dos diferentes patólogos.

Imnunohistoquimica
Los antígenos bacterianos fueron detectados por el método de adivina-biotina-peroxidasa siguiendo las instrucciones del fabricante. Se utilizaron anticuerpos policlonales, producidos por conejos en el laboratorio, contra células completas de A. pleuropneumoniae biotipo 1, serotipo 1, como anticuerpo primario a unadilución de 1:1 500 y como anticerpo secundario se utilizo una anti-lgG de conejo biotinilada. Los antígenos o restos antigénicos de A.pleuropneumoniae fueron identificados de color café oscuro, utilizando el cromógeno diamenobencidina(DAB). Posteriormente las muestras fueron teñidas con hermatoxilina de Harris como colorante de contraste. Se usaron secciones de tejido pulmonar de cerdosinoculados experimentalmente con A. pleuropneumoniae biotipo 1,serotipo1, y de cerdos sanos libres de A.pleuropneumoniae como testigos positivo y negativo, respectivamente.
Para evaluar la especificidad del antisuero se confrontaron los frotis bacterianos de pasteurella multocida serotipos A y D, haemophilus parasuis, bordetella bronchisepticay A. pleuropneumoniae serotipos 1, 5 , 9 , y 11 con elanticuerpo ploniclonal de A. pleuronpneumoniae serotipo 1.

Análisis estadístico
Para realizar el análisis estadístico se uso el paquete comercial stat-view se utilizo el análisis de ji-cuadrada para comparara los resultados del aislamiento bacteriano y de inmunohistoquimica, valores de p menor 0.05 fueron estadísticamente significativos.

Resultados

Aislamiento bacteriano y estudiohistopatológico

Once aislamientos de A.pleuropneumoniae fueron recuperados de 100 pulmones de cerdos sacrificados en rastro. Nueve aislamientos provenían de pulmones con lesiones macroscopicas compatibles con neumonía que estaban afectados entre 15% y 30% del parénquima, y dos aislaminetos se reailizaron a partir de pulmones sin lesiones microscópicas aparentes. Las lesiones macroscópicas se...