metrologia

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OBJETIVOS

1. Reconocer el adecuado funcionamiento del espectrofotómetro.
2. Determinar experimentalmente la longitud de onda óptima de tres soluciones coloreadas por medio de la realización de una curva espectral.
3. Analizar los datos obtenidos en las pruebas de precisión y exactitud.
4. Comprender el funcionamiento del espectrofotómetro en calidad deltiempo.
5. Relacionar el uso de la espectrofotometría con el campo de estudio de la microbiología.

1- MARCO REFERENCIAL
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas que absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida dependen de forma lineal de laconcentración. Además es usada para identificar compuestos por su espectro de absorción y conocer la concentración de un material o sustancia, esto último permite, seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas así como determinar enzimas y proteínas incluso ácidos nucleicos. [1]
Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, como ya sabemos es un equipo de laboratorio quemide la cantidad de luz que pasa por medio de una longitud de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un medio es proporcional a la concentración del soluto presente, es entonces así que la concentración de un soluto colorido en solución puede ser determinada en el laboratorio mediante la medición de su absorción de luz a una longitud de onda específica.
Las muestras en estos equipos seutilizan en estado líquido y se colocan en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes tamaños y materiales.
En espectroscopia el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. En espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400nm) y el visible (400-780 nm).
La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una región de energía muy alta.
En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones deabsorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solución coloreada.
La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona suficiente energía por debajo de 320 nm.
La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra y l a absorbancia(A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma,

Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a mayor númerode moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución –a igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará-; y por último, depende de ε, una constante de proporcionalidad -denominada coeficiente de extinción- que es específica de cada cromóforo


2- ESPECIFICACIONES TÉCNICASDEL EQUIPO:
Interfaz estándar de interfaz serial: RS-232-C
Rango de medición: 0 a 2500 A
Exactitud fotométrica: < ± 0.005 A 0 a 0.500 A
< ±1 % 0.501 a 2500 A
Precisión fotométrica < ± 0.003 A 0 a 0.600 A
< ±0.5 % 0.601 a 2500 A
Deriva: 0.003 A en 30 en 30 min
Rango de longitud de onda: precisión alta en los 7 filtros 340, 405, 500, 5046, 578,620, 670 nm
Paso de banda: Rango...